[发明专利]一种卤醇脱卤酶的生产方法

摘要

本发明涉及一种卤醇脱卤酶的生产方法，是利用微生物发酵生产卤醇脱卤酶，通过优化发酵工艺和发酵培养基，提高卤醇脱卤酶的产量和活性。本发明利用的基因工程菌为表达了卤醇脱卤酶的重组大肠杆菌，发酵培养基的组成包括：酵母粉9~15g/L、甘油4.5~7.5g/L、NaCl8~11g/L、NaNO31~2g/L，KH2PO42~3g/L，K2HPO412~13g/L，微量元素2~5mg/L；所述微量元素包括CoCl2·6H2O、MnCl2·4H2O、CuCl2·4H2O和生物素等。本发明能够显著地提高卤醇脱卤酶的产量，酶活性可提高至900U/ml。

主权项

一种卤醇脱卤酶的生产方法，其特征在于：所述生产方法包括以下步骤：（1）、构建基因工程菌，配制摇瓶种子培养基和发酵培养基；所述基因工程菌为表达了卤醇脱卤酶的重组大肠杆菌；（2）、使基因工程菌斜面活化20~25小时，再将活化后的基因工程菌接种至装有摇瓶种子培养基的摇瓶中，在37℃的条件下振荡培养8~15小时，得到种子液；（3）、将经步骤（2）振荡培养后的种子液接入发酵培养基中进行发酵，按体积比，接种时种子液/发酵培养基=1%~10%；发酵培养的温度控制在25~37℃，发酵液的pH值控制在6.5~7.0；当发酵液中的细胞光密度≥20时，向发酵液中添加诱导剂，且诱导剂在发酵液中的加入质量占发酵液总量的0.01%~0.2%；然后继续发酵10~15小时；所述发酵培养基的组成包括：酵母粉9~15g/L、甘油4.5~7.5g/L、NaCl 8~11g/L、NaNO3 1~2g/L，KH2PO4 2~3g/L，K2HPO4 12~13g/L，微量元素2~5mg/L；（4）、从经过步骤（3）的发酵液的培养物中取得所述卤醇脱卤酶。