[发明专利]一种体外诱导人间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的方法

摘要

本发明涉及生物医学领域，具体地说是涉及一种体外诱导间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化的方法，技术方案：构建SRF基因的重组真核表达质粒，真核表达载体包括是pEGFP、pcDNA或pCMV；将人间充质干细胞首先预诱导为nestin+细胞，进一步诱导为胰腺始祖细胞，然后将含有SRF基因的真核表达载体转染到上述细胞中，最后诱导为胰岛素分泌细胞。本发明可为糖尿病的细胞治疗提供新的种子细胞来源，为间充质干细胞的定向诱导分化为胰岛素分泌细胞和其临床应用提供新的理论和实验依据，并为与之相关的药物开发和筛选提供了新的模型。

主权项

一种体外诱导人间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)构建含有SRF基因的重组真核表达质粒；(2)诱导人间充质干细胞向Nestin+细胞分化：当步骤(1)中细胞至70‑80％融合时，去除原有培养基，加入诱导培养基Ⅰ培养5～6小时；所述步骤(2)中所述诱导培养基Ⅰ为含有5mmol/L β‑巯基乙醇和2％胎牛血清的DMEM‑高糖培养基，含25mM葡萄糖；(3)诱导Nestin+细胞向胰腺始祖细胞分化：在步骤(2)获得细胞中，去除步骤(2)中诱导培养基Ⅰ，加入诱导培养基Ⅱ培养7～8天；步骤(3)中所述的诱导培养基Ⅱ为含有5～20nmol/L bFGF、5～20nmol/L EGF、2％B27、0.1％β‑巯基乙醇和2％胎牛血清的DMEM‑高糖培养基，含25mM葡萄糖；(4)诱导胰腺始祖细胞向胰岛素分泌细胞分化：在步骤(3)获得细胞中，去除步骤(2)中诱导培养基Ⅱ，加入诱导培养基Ⅲ，同时转染步骤(1)中的SRF基因的重组真核表达质粒，培养7～8天；步骤(4)中所述的诱导培养基Ⅲ为含有5～20nmol/L Exendin‑4、5～20mmol/L尼克酰胺、2％B27和2％胎牛血清的DMEM‑高糖培养基，含25mM葡萄糖。