[发明专利]土壤磷素生物活化真菌接种剂及其制备方法

摘要

一种土壤磷素生物活化真菌接种剂及其制备方法。取斜面菌种一支，在25℃条件下培养1-2天；用15mL无菌水洗脱孢子，制备孢子悬浊液，吸取10mL孢子悬浊液接种到100mL PD培养液的三角瓶中，在26℃条件下，震荡培养3-5天，获得液体菌种；将液体菌种按15-20％接种到一级种子PD培养液中，在27℃条件下℃，培养1-2天；将一级种子PD培养液按15-20％接种到二级种子PD培养液获得二级液体菌种；将二级液体菌种与灭菌草碳1∶4吸附然后粉碎得到孢子粉。

主权项

一种土壤磷素生物活化真菌接种剂的制备方法，具体包括以下步骤：A.取保藏号为CGMCC 3.4396的平阳正青霉(Eupenicillium euglaucum)的子囊孢子一接种环，放入无菌水中，利用漩涡混合器震荡1分钟，使子囊孢子均匀地分散在无菌水中，制备成子囊孢子悬液；B.取0.1ml上述的子囊孢子悬液，均匀涂布在水琼脂平板上；C.将水琼脂平板置于显微镜下挑取单孢子，以多个点的方式接种于第一选择性培养基平板上，在25‑27℃中培养10‑15天；D.挑取在选择性培养基平板上具有清晰溶磷圈菌落的分生孢子，接种到第二选择性培养基平板上，同样在在25‑27℃中培养10‑15天，然后筛选出一株具有最大溶磷圈和最大菌落直径的菌落分生孢子；E.将选出的分生孢子在25℃条件下培养1‑2天；再用15mL无菌水洗脱孢子，制备成孢子悬浊液，吸取10mL孢子悬浊液接种到100mLPD培养液的三角瓶中，在26℃条件下，震荡培养3‑5天，获得液体菌种；F.将液体菌与一级种子PD培养液种按15‑20％(体积)接种到一级种子PD培养液中，在27℃条件下，培养1‑2天；G.再将培养后的一级种子PD培养液与二级种子PD培养液按15‑20％(体积)接种到二级种子PD培养液中，在26‑27℃条件下发酵 3天，获得二级液体菌种；H.将二级液体菌种与灭菌草碳1∶4(重量)吸附，在27℃的条件下，空气相对湿度大于85％条件下，保湿培养2‑5天，干燥粉碎得到孢子粉。