[发明专利]黄嘌呤氧化酶抑制剂和/或超氧阴离子清除剂的筛选方法有效
申请号: | 201210092278.7 | 申请日: | 2012-03-31 |
公开(公告)号: | CN103364519A | 公开(公告)日: | 2013-10-23 |
发明(设计)人: | 吴弢;李相坤;唐吉鹤;陶宏迅;孙天杰 | 申请(专利权)人: | 上海中医药大学 |
主分类号: | G01N30/90 | 分类号: | G01N30/90 |
代理公司: | 上海浦一知识产权代理有限公司 31211 | 代理人: | 潘诗孟 |
地址: | 201203 上海市浦*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | 本发明公开了一种利用薄层色谱与生物自显影技术联用快速筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂或者超氧阴离子清除剂的方法,本发明将薄层色谱和生物活性测定相结合,通过酶促反应产生的超氧阴离子自由基(O2.-)与氯化硝基四氮唑蓝(nitroblue tetrazolium,NBT)反应产生蓝紫色不溶物甲瓒(formazan),具有抑制黄嘌呤氧化酶或者清除超氧阴离子的物质抑制了该反应的发生,在薄层板上表现为紫色背景下的黄色和/或白色斑点。本发明适用于分析天然药物和/或中药提取物或者单体化合物对黄嘌呤氧化酶体外抑制活性或者超氧阴离子的清除活性。 | ||
搜索关键词: | 黄嘌呤 氧化酶 抑制剂 阴离子 清除 筛选 方法 | ||
【主权项】:
一种黄嘌呤氧化酶抑制剂和/或超氧阴离子清除剂的筛选方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)酶促反应缓冲液:称取磷酸氢二钾和磷酸二氢钾,用蒸馏水配制成磷酸缓冲液;将磷酸缓冲液与乙二胺四乙酸二钠盐混合,配制成酶促反应的缓冲液;(2)薄层板选用硅胶板,显色剂由黄嘌呤和氯化硝基四氮唑蓝组成;将待测提取物或者化合物点于硅胶板上,和/或用展开剂展开后,挥干有机溶剂,然后将薄层板在黄嘌呤氧化酶溶液中浸渍,将薄层板活化,将活化后的薄层板在显色剂中浸渍后反应,具有抑制黄嘌呤氧化酶的活性物质抑制了反应的发生,在薄层板上表现为紫色背景下的白色和/或黄色斑点。
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