[发明专利]一种适用于超薄切片和荧光成像的生物样品制备方法

摘要

本发明涉及一种适用于超薄切片和荧光成像的生物样品制备方法，属于生物工程技术领域。本发明采用4％多聚甲醛对荧光蛋白标记的生物组织进行固定，样品经0.01mol/L PBS溶液漂洗后，用乙醇溶液进行递度脱水，但脱水浓度不超过95％。之后，样品用改良后的乙二醇甲基丙烯酸酯(GMA)进行渗透及包埋。该方法所得包埋的生物样品具备进行连续超薄切片的硬度且能同时保持荧光信号。本发明方法成本低廉，操作步骤简单，适合在一般实验室推广使用。

主权项

一种适用于超薄切片和荧光成像的生物样品制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将生物样品用冰水预冷却的浓度为4％的多聚甲醛固定液固定6～24小时；(2)将步骤(1)得到的生物样品用冰水预冷却的漂洗液清洗3～24小时，其间更换新鲜漂洗液3次；(3)将步骤(2)得到的生物样品依次放入冰水预冷却的浓度为50％，70％和95％乙醇溶液中进行梯度脱水，每次15分钟到2小时；(4)将步骤(3)得到的生物样品依次放入冰水预冷却的浓度为70％，85％和100％的乙二醇甲基丙烯酸酯(GMA)水溶性包埋液中进行梯度渗透，每次渗透1～3小时，随后再次放入新鲜的浓度为100％的GMA水溶性包埋液中渗透6～12小时，最后在预聚的GMA水溶性包埋液中渗透1～3天；(5)将步骤(4)得到的生物样品放入充满预聚的GMA水溶性包埋液的包埋模具中隔氧包埋，然后置入58℃～60℃烘箱中聚合36～60小时。