[发明专利]一种高纯度纳豆激酶的制备方法

摘要

本发明涉及食品工程中有关采用液体纯种发酵生物技术领域，具体的说是一种高纯度纳豆激酶的制备法，采用细菌划线或涂布分离出单一的纳豆枯草杆菌(Bacillus subtilis natto)，并在固体和液体培养基上进行纯种培养，采用液体深层发酵技术进行纳豆枯草杆菌的发酵，发酵产物通过离心或过滤的方法去除菌体，获得澄清的含纳豆激酶的培养液，上述培养液经过柱层析的方法去除其他杂质，纳豆激酶从层析柱上洗脱，再经浓缩、干燥得到产品，本发明同现有技术相比，去除了食品纳豆中含的嘌呤和维生素K2；采用细菌纯种培养、液体深层发酵，柱层析法得到了更高纯度的纳豆激酶。

主权项

一种高纯度纳豆激酶的制备法，其特征在于由以下工艺步骤组成：a、采用细菌划线或涂布分离出单一的纳豆枯草杆菌，并在固体和液体培养基上进行纯种培养，所述的固体培养基质量浓度为蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、葡萄糖3.5g/L、氯化钠10g/L、琼脂15g/L，pH 7.0；所述的液体培养基质量浓度为：大豆蛋白胨10g/L、葡萄糖10g/L、牛肉膏5g/L、氯化钠2g/L，pH 7.0，培养温度为35‑42℃，b、采用液体深层发酵技术进行纳豆枯草杆菌的发酵，发酵温度为38～42℃；发酵时间为30‑72hr，并通过震荡、搅拌或通气的方法供氧，c、发酵后通过离心或过滤的方法去除菌体，获得澄清的含纳豆激酶的培养液，d、上述培养液经过柱层析的方法去除其他杂质，纳豆激酶从层析柱上洗脱，再经浓缩、干燥，然后用聚丙烯酰胺凝胶检测，产物呈一28kDa的条带，用纤维平板检测可见清晰的纤维溶解圈。