[发明专利]一种治疗银屑病的中药洋金花胶囊的检测方法

摘要

一种治疗银屑病的中药洋金花胶囊的质量控制方法。银屑病是发病机理复杂而尚未被阐明的皮肤病。本方法进行薄层鉴别洋金花胶囊有效部位中是否含有3‑O‑β‑D‑葡萄吡喃糖基、洋金花苷C、5α，12β，27‑三羟基‑6α，7α‑环氧、20R，22R、‑1‑酮‑醉茄‑2，24‑二烯内酯‑27‑O‑β‑D‑葡萄吡喃糖苷、生物碱类成分；紫外分光光度法测定了洋金花胶囊有效部位中总黄酮、总甾体的含量；反相高效液相法测定了洋金花胶囊有效部位中3‑O‑β‑D‑葡萄吡喃糖基(1→2)葡萄吡喃糖基‑7‑O‑α‑L‑鼠李吡喃糖基山柰酚、洋金花苷C的含量；建立了洋金花胶囊有效部位中生物碱的限量检查。本发明用于洋金花胶囊的质量控制。

主权项

一种治疗银屑病的中药洋金花胶囊的检测方法，其特征是：本方法的分为八个步骤是：第一步是薄层色谱鉴别中药洋金花胶囊有效部位中3‑O‑β‑D‑葡萄吡喃糖基(1→2)葡萄吡喃糖基‑7‑O‑α‑L‑鼠李吡喃糖基山柰酚的方法，第二步是薄层色谱鉴别洋中药金花胶囊有效部位中洋金花苷C即5α，12β，27‑三羟基‑6α，7α‑环氧‑(20R，22R)‑1‑酮‑醉茄‑2，24‑二烯内酯‑27‑O‑β‑D‑葡萄吡喃糖苷的方法，第三步是薄层色谱鉴别中药洋金花胶囊有效部位中生物碱类成分的方法，第四步是紫外分光光度法测定中药洋金花胶囊有效部位中总黄酮含量的方法，第五步是紫外分光光度法测定中药洋金花胶囊有效部位中总甾体含量的方法，第六步是高效液相法测定中药洋金花胶囊有效部位中3‑O‑β‑D‑葡萄吡喃糖基(1→2)葡萄吡喃糖基‑7‑O‑α‑L‑鼠李吡喃糖基山柰酚的含量的方法，第七步是高效液相法测定中药洋金花胶囊有效部位中洋金花苷C即5α，12β，27‑三羟基‑6α，7α‑环氧‑(20R，22R)‑1‑酮‑醉茄‑2，24‑二烯内酯‑27‑O‑β‑D‑葡萄吡喃糖苷的含量的方法，第八步是生物碱的限量检查方法；所述的薄层色谱鉴别中药洋金花胶囊有效部位中3‑O‑β‑D‑葡萄吡喃糖基(1→2)葡萄吡喃糖基‑7‑O‑α‑L‑鼠李吡喃糖基山柰酚的方法，首先取中药洋金花胶囊1粒，加甲醇2‑5ml，密塞，超声提取30分钟，静置，滤过，滤液定容至4‑6ml作为供试品溶液，然后另取对照品3‑O‑β‑D‑葡萄吡喃糖基(1→2)葡萄吡喃糖基‑7‑O‑α‑L‑鼠李吡喃糖基山柰酚2mg，加甲醇定容至9‑11ml容量瓶中，制成对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液，分别点于同一聚酰胺薄膜板上，以甲醇‑水‑冰醋酸4∶6∶0.1为展开剂，5％三氯化铝乙醇溶液显色后，置紫外灯254nm或365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，以确定样品中是否含有3‑O‑β‑D‑葡萄吡喃糖基(1→2)葡萄吡喃糖基‑7‑O‑α‑L‑鼠李吡喃 糖基山柰酚；所述的薄层色谱鉴别中药洋金花胶囊有效部位中洋金花苷C即5α，12β，27‑三羟基‑6α，7α‑环氧‑(20R，22R)‑1‑酮‑醉茄‑2，24‑二烯内酯‑27‑O‑β‑D‑葡萄吡喃糖苷的方法，取中药洋金花胶囊20粒，加甲醇90‑110ml，密塞，超声提取25‑35分钟，静置，滤过，制的回收滤液，用2‑10ml水转出制成水转出液；水转出液经D941大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，水洗脱液收干，用甲醇转出定容在9‑11ml容量瓶中，作为供试品溶液；另取对照品洋金花苷C5α，12β，27‑三羟基‑6α，7α‑环氧‑(20R，22R)‑1‑酮‑醉茄‑2，24‑二烯内酯‑27‑O‑β‑D‑葡萄吡喃糖苷，精密称定，加甲醇制成每1ml中含对照品10.5μg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和溶液对照品溶液，分别点于同一硅胶H薄层板上，以二氯甲烷‑甲醇‑水比例是8∶1∶0.1为展开剂，展开，取出，吹干，喷以9‑11％硫酸‑乙醇溶液，100‑110℃加热至显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，以确定样品中是否含有洋金花苷C、即5α，12β，27‑三羟基‑6α，7α‑环氧‑(20R，22R)‑1‑酮‑醉茄‑2，24‑二烯内酯‑27‑O‑β‑D‑葡萄吡喃糖苷，所述的薄层色谱鉴别中药洋金花胶囊有效部位中生物碱类成分的方法，精密称取干燥氢溴酸东莨菪碱用甲醇配制成0.05‑0.15mg/ml的溶液，另精密称取干燥硫酸阿托品用甲醇配制成0.05‑0.15mg/ml的溶液；取中药洋金花胶囊90‑110粒，置90‑110ml容量瓶中，加甲醇50‑70ml湿润后，超声提取两次，每次25‑35min，滤过，滤液回收至干，残渣加0.4‑0.6mol/l的盐酸90‑110ml溶解，用氯仿萃取1‑3次、190‑210ml/次，弃去氯仿液，母液用氨水碱化至pH9～10，再用氯仿萃取1‑4次、190‑210ml/次，合并氯仿液，回收至干，用甲醇溶解转 出作为供试品溶液；吸取氢溴酸东莨菪碱溶液、硫酸阿托品溶液和供试品溶液点于同‑硅胶G薄层板上，以三氯甲烷‑甲醇‑氨水比例为5∶1∶0.1为展开剂，展开，取出，吹干，喷以碘化铋钾显色剂；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，未找到相同颜色斑点，以确定样品中是否含有氢溴酸东莨菪碱以及阿托品类生物碱成分，所述的紫外分光光度法测定中药洋金花胶囊有效部位中总甾体含量的方法，精密称取对照品洋金花苷C，加甲醇配制成每0.5‑1.5ml含对照品0.26‑3.00mg的溶液；另取中药洋金花胶囊20‑30粒，加甲醇90‑110ml，密塞，超声提取25‑35分钟，静置，滤过，回收滤液，用少量水转出制成水转出液；水转出液经D941大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，水洗脱液收干，用甲醇转出定容在4‑6ml容量瓶中；分别精密量取对照品溶液0.5‑1.5ml，供试品溶液0.04‑0.08ml分别置于具塞试管中，水浴蒸干，分别加入0.5‑1.5％香草醛‑高氯酸0.4‑0.6ml，置50‑70℃恒温水浴上充分混匀后，加热10‑20min，立即用冰水冷却1‑3min，加入75‑80％H2SO4溶液3‑7ml，摇匀，以试剂做空白；照紫外‑可见分光光度法检测；在515‑519nm的波长处测定吸光度；计算，即得；中药洋金花胶囊每粒含总甾体以洋金花苷C的含量计，不得少于0.60‑0.80mg，所述的高效液相法测定中药洋金花胶囊有效部位中3‑O‑β‑D‑葡萄吡喃糖基(1→2)葡萄吡喃糖基‑7‑O‑α‑L‑鼠李吡喃糖基山柰酚的含量的方法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈‑四氢呋喃比例为90‑110∶1‑3的水为流动相；检测波长260‑270nm；理论塔板数不低于4000；取3‑O‑β‑D‑葡萄吡喃糖基(1→2)葡萄吡喃糖基‑7‑O‑α‑L‑鼠李吡喃糖基山柰酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每0.5‑1.5ml含8‑12μg的溶液；另取中药洋金花胶囊1粒，加甲醇8‑12ml，密塞，超声溶解，滤过，将滤液定容至40‑60ml容量瓶；分别精密 吸取对照品溶液与供试品溶液8‑12μl，注入液相色谱仪，测定，即得；中药洋金花胶囊每粒含3‑O‑β‑D‑葡萄吡喃糖基(1→2)葡萄吡喃糖基‑7‑O‑α‑L‑鼠李吡喃糖基山柰酚不得少于50‑60μg，所述的高效液相法测定中药洋金花胶囊有效部位中洋金花苷C即5α，12β，27‑三羟基‑6α，7α‑环氧‑(20R，22R)‑1‑酮‑醉茄‑2，24‑二烯内酯‑27‑O‑β‑D‑葡萄吡喃糖苷的含量的方法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈‑水为流动相；检测波长220‑230nm；理论塔板数不低于4000；另取洋金花苷C对照品5‑10mg，精密称定，加甲醇制成每0.5‑1.5ml含10‑11μg的对照品溶液；取中药洋金花胶囊10‑30粒，加甲醇90‑110ml，密塞，超声提取25‑35分钟，静置，滤过，回收滤液，用2‑10ml水转出制成水转出液；水转出液经D941大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，水洗脱液收干，用甲醇转出定容在8‑12ml容量瓶中制成供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；中药洋金花胶囊每粒含洋金花苷C5α，12β，27‑三羟基‑6α，7α‑环氧‑(20R，22R)‑1‑酮‑醉茄‑2，24‑二烯内酯‑27‑O‑β‑D‑葡萄吡喃糖苷，不得少于4μg。