[发明专利]一种苯环利定人工抗原的制备方法

摘要

本发明提供了一种苯环利定人工抗原的制备方法，第一步为半抗原的制备及检测：以1-苯基环己醇为原料，利用叠氮钠引入叠氮基，再利用氢化铝锂还原叠氮基制得1-苯基环己胺，然后和戊二酸酐反应得到含羧基的半抗原；第二步为人工抗原的制备与检测：通过碳二亚胺法使之与牛血清蛋白(BSA)结合制备苯环利定人工抗原即苯环利定-牛血清蛋白。所制备的苯环利定人工抗原可进行动物免疫，取得相应的苯环利定抗体，可用于各种苯环利定类免疫分析法的研究，为苯环利定的检测提供更加方便快速准确的途径。

主权项

1.一种苯环利定人工抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1) 制备人工半抗原：(a) 将1-苯基环己醇与叠氮钠、三氟乙酸以摩尔比为1：2：5.7溶于氯仿中，室温搅拌反应5小时；反应结束后用浓氨水调至碱性，有机相经双蒸水和饱和食盐水溶液洗涤后，减压蒸馏得到含叠氮基化合物；TLC：层析液为正己烷：乙酸乙酯=4:1，产物R_f =0.7~0.8；(b) 将含叠氮基化合物与氢化铝锂以摩尔比为1：1.5溶于无水乙醚中, 冰浴反应1小时后，再室温搅拌反应5小时；反应结束后加入双蒸水和氢氧化钠水溶液，氯仿萃取，有机相减压蒸馏后经薄层层析法纯化得到产物1-苯基环己胺；TLC：层析液为石油醚：乙酸乙酯=2:1，产物R_f =0.2~0.3；(c) 将产物1-苯基环己胺与戊二酸酐以摩尔比为1：1.2溶于无水吡啶中，100℃反应5小时；反应结束后进行减压蒸馏, 得到的粗产物经薄层层析法纯化得到苯环利定半抗原；TLC：层析液为为95%乙醇，产物R_f =0.5~0.6；    (2) 制备苯环利定人工抗原：(d) 将半抗原与N-羟基琥珀酰亚胺、环己基碳酰二亚胺以摩尔比为1:1.5:1.5溶于N,N-二甲基甲酰胺中，室温搅拌反应18小时，反应结束后离心取上清液记为A液；(e) 将氯化钠与十二水磷酸氢二钠、二水磷酸二氢钠以摩尔比为78.3:4.2:1溶于双蒸水中，制备钠离子浓度为0.1mol/L的PBS缓冲液，pH为7.2~7.4；(f) 将牛血清蛋白溶于PBS缓冲液中，得到浓度为20mg/ml的B液；(g) 将A液缓慢滴加到B液，A液与B液的体积比为1:5，得到的混合液在4℃条件下静置保存过夜，得到人工抗原混合液；(h) 将人工抗原混合液于PBS缓冲液中透析，透析结束后离心取上清液即得到人工抗原：苯环利定-牛血清蛋白。