[发明专利]微生物发酵生产乳酸脱氢酶的方法无效
| 申请号： | 201210106897.7 | 申请日： | 2012-04-12 |
| 公开（公告）号： | CN102653734A | 公开（公告）日： | 2012-09-05 |
| 发明（设计）人： | 迟乃玉;张庆芳;石淑钰 | 申请（专利权）人： | 大连大学 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04 |
| 代理公司： | 大连智慧专利事务所 21215 | 代理人： | 刘琦 |
| 地址： | 116622 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明所述的一种微生物发酵生产乳酸脱氢酶的方法是将产生乳酸脱氢酶的微生物进行6～10次活化，再经过产物定向驯化4～6次，使其在26～32℃环境条件下生长良好；按常规方法将产物定向驯化后的乳酸脱氢酶产生菌在26～32℃逐级扩大培养，按发酵液体积的4～10％接种量接入液体发酵培养基中，在26～32℃培养60～114h时，即微生物发酵生产乳酸脱氢酶结束；发酵液在6,000～8,000rpm离心收集菌体，数次洗涤后收集沉淀，悬浮于缓冲液中，并加石英砂研磨，10,000～14,000rpm离心收集上清即为粗酶液；根据不同需要和使用对象不同，可以将粗酶液进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。 | ||
| 搜索关键词： | 微生物 发酵 生产 乳酸 脱氢酶 方法 | ||
【主权项】：
一种微生物发酵生产乳酸脱氢酶的方法，其包括以下步骤：(1)将产生乳酸脱氢酶的微生物进行6～10次活化，再经过产物定向驯化4～6次，使其在26～32℃环境条件下生长良好；(2)按常规方法将产物定向驯化后的乳酸脱氢酶产生菌在26～32℃逐级扩大培养，制备成液体一级种子和二级种子；(3)将液体一级种子或二级种子，按发酵液体积的4～10％接种量接入液体发酵培养基中，在26～32℃培养60～114h时，即微生物发酵生产乳酸脱氢酶结束；(4)将(3)的发酵液在6,000～8,000rpm离心收集液体，用蒸馏水洗涤数次之后离心收集沉淀；(5)将沉淀悬浮于缓冲液中，加石英砂研磨破碎，10,000～14,000rpm离心，收集到的上清为乳酸脱氢酶粗酶液；(6)根据不同需要和使用对象不同，将(5)得到的粗酶液进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。
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