[发明专利]基于卵黄抗体的甲鱼系统性败血症球状病毒间接ELISA检测方法

摘要

本发明公开了基于卵黄抗体的甲鱼系统性败血症球状病毒间接ELISA检测方法，特点是包括将0.1ng/ul的甲鱼系统性败血症球状病毒抗原按100ul/孔加于聚苯乙烯96孔反应板中进行预包被，并采用牛血清白蛋白封闭液进行封闭的步骤；将每孔加入倍比稀释的甲鱼系统性败血症球状病毒卵黄抗体，并加入辣根过氧化酶标记的羊抗鸡IgG和邻苯二胺底物溶液显色反应的步骤；最后在酶标仪上读取各孔492nm波长处的吸光度值，测定孔吸光度值大于阴性对照孔均值2.1倍以上者判为阳性，优点是具有稳定性、特异性和灵敏度高、免疫干扰小、背景低等效果。

主权项

一种基于卵黄抗体的甲鱼系统性败血症球状病毒间接ELISA检测方法，其特征在于包括以下步骤：（1）抗原预包被将甲鱼系统性败血症球状病毒抗原用.01 M 的pH 为9.6的碳酸盐缓冲液稀释至0.1 ng/ul，按100ul/孔加于聚苯乙烯96孔反应板中，4℃放置过夜，次日倾去孔内液体，将孔用PBS‑T洗涤液洗涤3次后，每孔加入1 % 牛血清白蛋白封闭液，37 ℃低速振荡温育1 h进行封闭，封闭结束后，吸走孔内牛血清白蛋白封闭液；（2）检测反应将孔用PBS‑T洗涤液清洗后，加入倍比稀释的甲鱼系统性败血症球状病毒卵黄抗体100ul，每梯度设1平行，同时设立空白对照和阴性对照，加盖37 ℃温育1 h后，用PBS‑T洗涤液洗3次，再在每孔中加入100ul的预先用1%牛血清白蛋白封闭液按1：10000比例稀释的辣根过氧化酶标记的羊抗鸡IgG，37 ℃温育1 h后，PBS‑T洗涤液清洗5次，蒸馏水洗3次后，每孔加入新配置好的邻苯二胺底物溶液100ul，37 ℃暗处显色15 min，每孔加50ul的2M H2SO4终止反应；（3）结果判定在酶标仪上读取各孔492 nm波长处的吸光度值，测定孔吸光度值大于阴性对照孔均值2.1倍以上者判为阳性。