[发明专利]微生物发酵生产低温过氧化氢酶的方法无效
| 申请号： | 201210109039.8 | 申请日： | 2012-04-13 |
| 公开（公告）号： | CN102653738A | 公开（公告）日： | 2012-09-05 |
| 发明（设计）人： | 迟乃玉;张庆芳;王晓辉;窦少华;于爽;奥杰 | 申请（专利权）人： | 大连大学 |
| 主分类号： | C12N9/08 | 分类号： | C12N9/08 |
| 代理公司： | 大连智慧专利事务所 21215 | 代理人： | 刘琦 |
| 地址： | 116622 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明所述的一种微生物发酵生产低温过氧化氢酶(简称为CAT)的方法是将产生CAT的微生物逐级低温驯化，使其在低温环境中生长良好；将低温驯化后的CAT产生菌在10～16℃逐级扩大培养，按发酵液体积的3～9％接种量接入液体发酵培养基中，在10～16℃培养72～144h时，即微生物发酵生产低温CAT结束；发酵液在4,000～8,000rpm离心收集液体，用蒸馏水洗涤数次之后离心收集沉淀；将沉淀悬浮于缓冲液中，加石英砂研磨破碎，10,000～14,000rpm离心，收集到的上清为CAT粗酶液；根据不同需要和使用对象不同，可以将粗酶液进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。 | ||
| 搜索关键词： | 微生物 发酵 生产 低温 过氧化氢酶 方法 | ||
【主权项】：
一种微生物发酵生产低温过氧化氢酶(简称为CAT)的方法，其包括以下步骤：(1)将产生CAT的微生物逐级低温驯化，驯化温度由高到低，25℃→22℃→20℃→18℃→16℃→14℃→12℃→10℃，使其在低温环境中生长良好；(2)按常规方法将低温驯化后的CAT产生菌在10～16℃逐级扩大培养，制备成液体一级种子和二级种子；(3)将液体一级种子或二级种子，按发酵液体积的3～9％接种量接入液体发酵培养基中，在10～16℃培养72～144h时，即微生物发酵生产低温CAT结束；(4)将(3)的发酵液4,000～8,000rpm离心收集菌体，用蒸馏水洗涤数次之后离心收集沉淀；(5)将沉淀悬浮于缓冲液中，加石英砂研磨破碎，10,000～14,000rpm离心，收集到的上清为CAT粗酶液；(6)根据不同需要和使用对象不同，将(5)得到的粗酶液进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。
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