[发明专利]龙脑樟规模化繁殖的生产方法

摘要

本发明一种龙脑樟规模化繁殖的生产方法，采用抗病强、无病虫害、经检测药用成份稳定和平均含量高的成年优良母树的当年生木质化枝条，经独特扦插处理而获得的小植株经培育一年左右，利用其当年萌发的芽作为外植体，无菌材料获得后，对无菌材料进行驯化与继代扩繁，然后进行壮苗生根培养，最后温室培养出幼苗，本发明对诱导、扩繁、壮苗、生根的培养基进行优化改良，可以有效保证无菌材料的稳定生长，芽大小均匀，不会产生组培苗玻璃化或脱叶现象，保证组培苗的健壮稳定获得，重复性强，驯化周期，继代周期稳定，减轻褐化提高扩繁系数，提高温室种植成活率，且本发明的继代团块切割方法，决定了后期材料的长势与扩繁系数，能满足大规模生产的需要。

主权项

一种龙脑樟规模化繁殖的生产方法，其特征在于包括如下步骤：步骤1、母株选择、外植体培育与预处理：在春季，选择优良、健壮、无病虫害、经测定药效成份稳定且右旋龙脑含量高的多年生龙脑樟为原种，从该龙脑樟原种上截取一年生的枝条作为扦插母本，在该扦插母本上剪取半木质化或已木质化枝条作为插穗，每个插穗带1～2个节，经过无菌处理后扦插到基质中；待插穗成活，其根系完整、新芽长出且有新叶抽后，移到盆/钵中放置温室进行常规扦插苗养护；当插穗的腋芽抽起10～15cm、枝条未木质化时，即可采集作为外植体，每个外植体长度约1～2.5cm；在采集外植体前需对插穗停止浇水、浇肥2～5天，待基质表面干燥或发白即可；步骤2、无菌材料获得：将采集好的外植体切去截面变色部分，接种于经灭菌好的4/5改良MS培养基中，培养条件为：温度25±1.5℃，光照时间14±2H/D，光照强度3.75‑6.25μmol·m‑2·s‑1，培养周期4～5周；所述的改良MS培养基指的是，将习知的MS中的CaCl2.2H2O 440mg.L‑1改为等量的Ca(NO3)2.4H2O，再添加柠檬酸50mg·L‑1、6‑BA  2.0‑6.0mg·L‑1、NAA 0.1‑0.5mg·L‑1、蔗糖30g·L‑1、卡拉胶5.5g·L‑1、pH 5.7；步骤3、无菌材料的驯化与继代扩繁：第一代无菌材料培养后，当顶芽抽出或茎段抽起长度大于20mm时，以1～2节为单位进行切割；当有侧芽分化时，以2～4芽团进行方向性切割，将切割好的芽团接种于经灭菌好的3/4改良MS培养基中，培养条件 为：温度26±2℃，光照时间14±2H/D，光照强度18.75‑22.5μmol·m‑2·s‑1，培养周期4～6周；所述的改良MS培养基指的是，将习知的MS中的CaCl2.2H2O 440mg.L‑1改为等量的Ca(NO3)2.4H2O，再添加柠檬酸50mg·L‑1、6‑BA  2.0‑3.0mg·L‑1、NAA 0.1‑0.5mg·L‑1、蔗糖30g·L‑1、卡拉胶5.5g·L‑1、pH 5.7；经上述2～3次转代培养后即完成驯化，进入扩繁阶段：进入扩繁阶段的芽继代材料为12‑20个芽/团，继代时，按3‑4芽/团切割，当芽丛上的枝条高于20mm时，保留下方1‑2节去顶后，接种于3/4MS改良培养基中，扩繁系数为3.5‑5.5；所述的改良MS培养基指的是，将习知的MS中的CaCl2.2H2O 440mg.L‑1改为等量的Ca(NO3)2.4H2O，再添加柠檬酸50mg·L‑1、6‑BA  1.0‑3.0mg·L‑1、NAA 0.1‑0.5mg·L‑1、蔗糖30g·L‑1、卡拉胶5.5g·L‑1、pH 5.7；步骤4、壮苗生根培养将经扩繁培养后的芽团按2‑4芽/团方向性切割后，接种到壮苗培养基中，培养条件为：温度26±1℃，光照时间14±2H/D，光照强度31.25‑37.5μmol·m‑2·s‑1，培养周期5～7周；该壮苗培养基为3/4改良MS培养基，在习知的MS培养基中添加柠檬酸50mg·L‑1，6‑BA  0.01‑0.5mg·L‑1、NAA  0.1‑0.3mg·L‑1、活性炭300‑500mg·L‑1、蔗糖25g·L‑1、卡拉胶6.0g·L‑1、pH 5.7；当壮苗培养后团块上的芽达到20‑35mm、具有两片完整叶且叶片平展时，切下来接种到生根培养基中，培养条件为：温度25±1℃，光照时间14±2D，光照强度31.25‑45.5μmol·m‑2·s‑1；该生根培养基为1/4改良MS培养基，在习知的MS培养基中添加柠檬酸50mg·L‑1，IBA 1‑3mg·L‑1、NAA 0.2‑0.5mg·L‑1、活性炭300‑500mg·L‑1、蔗糖25g·L‑1、卡拉胶7.0g·L‑1、pH 5.7；选择根数3～6条，植株高度达40～65mm以上，具有4片完整叶，长势健壮的作为生根苗；步骤5、温室种植将生根苗移至温室进行炼苗7‑10天后取出，将其根部的培养基清洗干净，无菌处理后种植至基质中，种植2‑3个月即可。