[发明专利]一种转基因小麦定量检测单拷贝RPL21内标准引物及应用有效
| 申请号： | 201210113251.1 | 申请日： | 2012-04-18 |
| 公开（公告）号： | CN103374614A | 公开（公告）日： | 2013-10-30 |
| 发明（设计）人： | 廖玉才;李和平;赵正喜;高春生;瞿波;黄涛;张静柏;左东云;杨鹏;程伟 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/10;C12N15/11 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 王敏锋 |
| 地址： | 430070 *** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种转基因小麦定量检测单拷贝RPL21内标准引物及应用，其步骤：A、通过不同数据库筛选结构基因，以非同源区段设计引物，并通过NCBI中Primer-Blast生物信息学工具检测设计引物的物种特异性，并验证其引物在不同数据库中的产物；B、灭菌消毒萌发35种不同小麦品种与15个不同物种种子，取叶片CTAB法提取DNA，并通过普通定性PCR验证其在不同物种间的种属特异性和不同小麦品种中的品种间稳定性,内标准基因引物序列为：名称 Accession 结合位点 序列5’-3’ Size Ta℃；RPL21-7 HM138481.1 928-955 For:CCTAGCCCGTTTCATCTAATGTGTCCTA 161 60；RPL21-8 1088-1062 Rev:TACTACCAACGAGAACCATTAGAGAGC。通过与Southern Blot结果进行比照，可以进行拷贝数精确定量，并且转基因小麦定性检测极限为0.2%，定量检测极限阈值为2%，拷贝数为5个六倍体小麦基因组，与预测的小麦理论检测极限一致。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 转基因 小麦 定量 检测 拷贝 rpl21 标准 引物 应用 | ||
【主权项】：
1.一种小麦检测内标准基因引物的制备方法，其步骤是：A、通过不同数据库筛选结构基因，以非同源区段设计引物，并通过NCBI中Primer-Blast生物信息学工具检测设计引物的物种特异性，并验证其引物在不同数据库中的产物；B、灭菌消毒萌发35种不同小麦品种与15个不同物种种子，取叶片CTAB法提取DNA，并通过普通定性PCR验证其在不同物种间的种属特异性和不同小麦品种中的品种间稳定性；内标准基因引物序列：![]()
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