[发明专利]一种二步衍生法同步分析碱基、核苷、有机酸、脂肪酸、氨基酸及糖类代谢产物的方法

摘要

本发明公开了一种二步衍生法同步分析碱基、核苷、有机酸、脂肪酸、氨基酸及糖类代谢产物的方法。该方法是将生物基质样本(如尿液、血液、脑脊液)及组织液等经过一系列超声、离心、肟化，除脲素、除磷、除硫、除蛋白、氮吹、真空干燥及三甲基硅烷化衍生等理化方法技术处理后，再采用气相色谱仪-质谱联合技术对生物基质样本进行检测。该方法能同时对生物基质样本进行程序化处理，一次性检测五大类以上物质400余种代谢中间和终末产物。

主权项

一种二步衍生法同步分析碱基、核苷、有机酸、脂肪酸、氨基酸及糖类代谢产物的方法，其特征是，具体步骤包括：1)取样：收集生物基样本；2)定量待测样品：对生物基样本进行物理洗脱并收集洗脱液；测定洗脱液中肌酐含量，确定肌酐浓度，取相当于2.50μmoL/μL肌酐浓度的洗脱液25μL‑300μL作为待测样品，备用；3)肟化处理过程，即直接在上述待测样品中加入2.5μl‑90μl肟化试剂，调PH值至7‑14，密封样品并加热至45℃‑70℃条件下，充分反应15min‑90min，使待测样品完成肟化反应，得肟化反应后的样品；所述肟化试剂的浓度为0.01μg/μl‑50μg/μl，肟化试剂选自盐酸羟胺水溶液、甲氧基胺盐‑吡啶溶液或乙氧基胺盐‑吡啶溶液；4)预处理：对肟化后的待测样品进行除磷及除硫、除脲素、除蛋白、超声和离心处理后取离心液b，然后干燥，得残留物，即为预处理后的样品；所述干燥是指氮气吹干或真空浓缩干燥或先真空浓缩干燥再氮气吹干；所述除磷及除硫是指在待测样品中加入0.08mol/L‑1.2mol/L的钡剂水溶液10μL‑200μL，震荡5‑30分钟后离心，收集离心液a；所述除脲素是指在上述离心液a中加入含脲素酶3u/μL‑6u/μL的水溶液30μL‑260μL，于25℃‑42℃温度下水浴10‑45分钟；所述除蛋白是指再加入相对于离心液a 1.5‑6.7倍体积的溶剂300μL‑2000μL震荡5‑30分钟，其中所述溶剂为甲醇、乙醇、丙酮酸、乙晴或吡啶；5)一次三甲基硅烷化衍生反应：在预处理后的样品中加入25μL‑300μL的三甲基硅烷化衍生剂，置干燥加热器上在3℃‑200℃温度下衍生10min ‑120min，得硅烷化衍生反应后的检测样品；6)采用气质联用分析方法对检测样品中的碱基、核苷、有机酸、脂肪酸、氨基酸及糖类代谢产物进行同步检测。