[发明专利]一种海洋双菌共固定化体系的构建和造纸废水处理的方法

摘要

本发明公开了一种海洋双菌共固定化体系的构建和造纸废水处理的方法。采用两种海洋真菌－微紫青霉菌和内生拟盘多毛孢菌进行共固定化。双菌共固定化体系和用于造纸废水处理的步骤为：（1）海洋微紫青霉菌菌丝球的制备：将微紫青霉菌接种到培养基中进行培养，形成具有一定机械强度的菌丝球；（2）共固定化菌丝球的制备：以海洋微紫青霉菌菌丝球为载体在含有一定海洋内生拟盘多毛孢菌孢子浓度的固定化培养基中进行固定化；（3）共固定化菌丝球用于造纸废水处理：将制得的共固定化菌丝球直接放入造纸废水中进行处理，得到纯清度好、几乎无色的水。本发明所开发的双菌共固定化方法，具有简单、快速、高效等优点，而且不需要进行任何物理或化学处理。

主权项

1.一种海洋双菌共固定化体系的构建和造纸废水处理的方法，其特征在于它的步骤如下：1）海洋微紫青霉菌菌丝球的制备：将保存于4℃的海洋微紫青霉菌固体斜面取出，用无菌水制成浓度为ｎ=10⁶～10⁹mL^-1的孢子悬液，以3～5%的接种量接入含100mL菌丝球培养基的500mL锥形瓶中，于160～180rpm/min,26～30℃下摇床培养4～5天，然后用水将多余的菌丝体洗去，过滤收集菌丝球，放入冰箱备用，菌丝球培养基的组成为：葡萄糖10～15g/L，酒石酸铵2～3g/L，KH₂PO₄ 2～3g/L，MgSO₄·5H₂O 0.5～1.0g/L，酵母提取物2～3g/L，pH 4.0～5.0，海洋微紫青霉菌保藏在中国典型培养物保藏中心，地址为中国.武汉.武汉大学，保藏日为2012年1月11日，分类命名Penicillium janthinellum CP1，保藏号为CCTCC M 2012006；2）固定化菌丝球制备：首先，用100mL预先灭过菌的蒸馏水制备浓度为1.0～3.0×10⁹/mL的海洋内生拟盘多毛孢菌孢子悬浮液，用于接种；接着，取5～10g海洋微紫青霉菌菌丝球，接种于含有固定化培养基的三角瓶中；然后，用移液管移取10mL海洋内生拟盘多毛孢菌孢子悬浮液接种于上述已经接有海洋微紫青霉菌菌丝球的三角瓶中，使得海洋内生拟盘多毛孢菌孢子悬浮液的最终浓度为1.0～3.0×10⁸/mL；最后，海洋内生拟盘多毛孢菌孢子和海洋微紫青霉菌菌丝球在含有固定化培养基的三角瓶中共固定化生长1～3天，培养结束后，用水将多余的菌丝体洗去，过滤收集菌丝球，放入冰箱备用，固定化培养基的组成为：葡萄糖20～30g/L，酒石酸铵4～6g/L，KH₂PO₄ 4～6g/L，MgSO₄·5H₂O 0.5～1.0g/L，酵母提取物2～3g/L，pH 4.0～5.0；3）固定化菌丝球用于造纸废水的处理称取2～5g固定化菌丝球，加入到含有100mL按1：4稀释的造纸废水的250mL三角瓶中振荡处理6～10h，转速140～160rpm,温度28-30℃，以不加固定化菌丝球的处理为空白对照，在相同的条件下处理，废水处理效果用生物降解率Y％来表征，即：其中，A₁为处理结束后空白对照测得的浊度；A₂为处理结束后样品测得的浊度，本发明结果表明，用固定化菌丝球对造纸废水进行6～10h的振荡处理，生物降解率可达96-99%。