[发明专利]一种分离两个紧密连锁的水稻不育基因的方法

摘要

本发明为一种分离两个紧密连锁的水稻不育基因的方法，属于水稻分子遗传学领域。以染色体片段置换系AIS34为母本、Asominori为父本杂交，F1代开始，选择半不育植株进行杂交，得到BC1F1群体，在回交群体中通过分子标记辅助选择，结合表型鉴定，选择半不育的植株连续回交，一直回交到BC4F1世代，再自交得到分离群体，分别对两个紧密连锁的花粉不育基因和小穗不育基因进行定位。结果表明，通过这种方法，可将花粉不育基因精细定位在33kb区域，同时将紧密连锁的雌配子不育基因精细定位在90kb的区域内。

主权项

一种分离两个紧密连锁的水稻不育基因的方法，包括：1)以染色体片段置换系AIS34为母本、轮回亲本Asominori为父本进行杂交，从杂种BC1F1代开始，在杂交后代群体中，选择植株花粉育性和小穗育性都为半不育的植株与轮回亲本Asominori再进行杂交；2)上述AIS34/Asominori//Asominori回交群体的单株种植后进行2个分子标记ZZ1和ZZ2的辅助选择：苗期各单株取叶片提取DNA，用ZZ1标记引物：ZZ1‑F：SEQ ID NO.1，ZZ1‑R：SEQID NO.2，扩增上述各单株DNA，既能扩增得到193bp条带又能扩增到182bp条带的为含杂合片段的植株，只能扩增长度182bp条带的为纯合轮回亲本Asominori基因型的植株；选择既能扩增得到193bp条带又能扩增到182bp条带的含杂合片段的植株与轮回亲本Asominori再进行杂交；另一个分子标记ZZ2位于染色体置换片段的下端，ZZ2标记引物：ZZ2‑F：SEQ ID NO.3，ZZ2‑R：SEQ ID NO.4，扩增上述各单株DNA，既能扩增得到218bp条带又能扩增到195bp条带的为含杂合片段的植株，只能扩增长度195bp条带的为纯合轮回亲本Asominori基因型的植株；选择既能扩增得到片段长度218bp的条带又能扩增到195bp条带的含杂合片段的植株与Asominori再进行杂交；对获得的植株再进行表型的鉴定，选择植株花粉育性和小穗育性为半不育的单株，生育期、株高、株叶形态与轮回亲本Asominori一致的单株种植；选择4代后，自交一代，获得较大的分离群体进行花粉育性和雌配子育性基因的定位；3)通过分子标记ZZ1选择得到在该标记位点为杂合状态的带型，而在ZZ2为纯合状态的带型为只有花粉半不育的单株，通过分子标记ZZ1在该标记位点为纯合状态的带型，而在ZZ2为杂合状态的带型为只有小穗半不育的单株；在分离群体中进一步开发分子标记，分别将花粉不育基因和雌配子不育基因进行精细定位。