[发明专利]一种直接从感病小麦叶片上高效快速提取小麦条锈菌DNA的方法

摘要

本发明公开了一种直接从感病小麦叶片上高效快速提取小麦条锈菌DNA的方法，其特征在于，吸取20μl配好的20％的chelex-100混悬液于100μl PCR管中，吸取5μl的Chelex-100上清液于长有小麦条锈菌夏孢子小麦叶片上，并在滴有Chelex-100上清液的病斑处反复涂抹叶片多次，将锈孢子洗下后，吸回叶片上含有锈孢子的Chelex-100上清液并加入到装有20μl 20％chelex-100混悬液的PCR管中，用移液器反复吸取混匀，放入沸水浴中水浴2min，再放到旋涡混合器上振荡混匀10s，水浴5min后保存于-20℃备用，上清液均可作为PCR的模板。建立一套高效、快速、可直接从感小麦条锈病菌的植株上提取小麦条锈病菌DNA作为PCR扩增模板的方法。

主权项

一种直接从感病小麦叶片上高效快速提取小麦条锈菌DNA的方法，其特征在于，吸取20μl配好的20％的chelex‑100混悬液于100μl PCR管中，吸取5μl的Chelex‑100上清液于长有小麦条锈菌夏孢子小麦叶片上，并在滴有Chelex‑100上清液的病斑处反复涂抹叶片多次，将锈孢子洗下后，吸回叶片上含有锈孢子的Chelex‑100上清液并加入到装有20μl 20％chelex‑100混悬液的PCR管中，用移液器反复吸取混匀，放入沸水浴中水浴2min，再放到旋涡混合器上振荡混匀10s，水浴5min后保存于‑20℃备用，上清液均可作为PCR的模板；真菌核糖体rDNA‑ITS引物：F：5′‑TCCGTAGGTGAACCTGCGG‑3′，R：5′‑TCCTCCGCTTATTGATATGC‑3′；小麦条锈病菌特异性引物CYR33：F：5′‑TGTCGTCTCGCCAATCTTT‑3′，R：5′‑GCGGGTGTCAGTTTCTCC‑3′，进行PCR扩增，PCR扩增体系为10μl，其中用1μl上清液做DNA模板，5μl的supperMix，0.8μl的引物，ddH2O 3.2μl；扩增程序为94℃3min，94℃50s，53℃或51℃1min，72℃1min，30循环，72℃10min；用1.5％的琼脂糖凝胶检测PCR产物。