[发明专利]一种从鸡血中提取大量高纯度DNA的方法

摘要

本发明公开了一种从鸡血中提取大量高纯度DNA的方法，包括以下步骤：吸取解冻的DNA保存液保存的鸡血样品到含试剂X的离心管中；用移液枪反复垂悬，直到使原血样变为澄清的液体状；离心，弃掉上清液；加入试剂Y，轻轻悬浮上一步离心后的沉淀物；加入Rnase A，混匀后，37℃温浴30min；加入5mol/L高氯酸钠，手动振荡混合10min；水浴，期间每隔5min手工晃动一次；加入预冷的三氯甲烷，混合5min；离心，吸取上清到另一离心管中；加入等体积的异丙醇，缓慢摇动，即可见絮状DNA；用预冷的75％乙醇洗涤2次，晾干，用适量的TE溶解，4℃存放一周，转至-20℃长期保存；本发明提取DNA耗时较短、提取的DNA样品纯度高，浓度大、质量好，能完全满足下游分子生物学实验的要求。

主权项

一种从鸡血中提取大量高纯度DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：吸取100μl解冻的DNA保存液保存的鸡血样品100μl到含300μl试剂X的1.5ml离心管中；用移液枪反复垂悬，直到使原血样变为澄清的液体状；4000rpm离心5min，弃掉上清液；加入1ml的试剂Y，轻轻悬浮上一步离心后的沉淀物；加入5μl的RnaseA，混匀后，37℃温浴30min；加入250μl的5mol/L高氯酸钠，手动振荡混合10mm；55℃水浴20min，期间每隔5min手工晃动一次；加入300μl预冷的三氯甲烷，混合5min；12000r/min离心5min，吸取上清到另一离心管中；加入等体积的异丙醇，缓慢摇动，即可见絮状DNA；用预冷的75％乙醇洗涤2次，晾干，用适量的TE溶解，4℃存放一周，转至‑20℃长期保存；所述的DNA保存液：TrisCl 3.03g，，Na2EDTA9.31g，SDS 2.50g加水搅拌溶解，定容至250ml；所述的试剂X配制方法：将1mol/LTrisCl(pH 8.0)，1mol/LMgCl2，体积百分比10％的Triton X‑100按比例混合，再加入一定量的蔗糖，使混合液中各成分的终浓度为：10mmol/L Tris·Cl；0.32mol/L蔗糖；5mmol/L MgCl2；1％Triton X‑100；然后用NaOH调整pH值至8.0，高压灭菌；所述的试剂Y配制方法：将1mol/L TrisCl、pH 8.0，0.5mol/L Na2EDTA按比例混合，再加入一定量的NaCl固体和水，使混合液中各成分的终浓度为：400mmol/LTrisCl；60mmol/L Na2EDTA；150mmol/L NaCl。然后高压灭菌。再加入一定量的10％SDS，使SDS在试剂Y混合液中的质量百分比浓度为1％。