[发明专利]一种β-1,3葡聚寡糖的寡聚化制备方法

摘要

一种β-1,3葡聚寡糖的寡聚化制备方法，属于生物工程技术领域。本发明方法以热凝胶为原料，通过β-葡聚糖酶先酸解再酶解，或先酶解再酸解处理后得到寡糖溶液，再用超滤膜进行截留分离和浓缩，获得聚合度为4～15DP的β-1,3葡聚寡糖，可应用于植物抗病疫苗。本发明由于采用温和的酶解和酸解混合法来进行热凝胶的寡聚化，使得酶解反应便于控制，同时由于采用较低温度的水解条件使得在不破坏β-1,3-葡聚寡糖的结构的条件下，能耗得以节约；且由于采用酸解与酶解和膜分离浓缩技术，使得整个生产工艺不产生环境污染，低能耗，低成本。本发明方法具有反应温和，便于控制反应进程，以及能耗低，对环境友好等优点。

主权项

1.一种β-1,3葡聚寡糖的寡聚化制备方法，其特征在于以热凝胶为原料，通过β-葡聚糖酶对热凝胶进行先酸解再酶解，或先酶解再酸解处理后得到寡糖溶液，再用超滤膜进行截留分离和浓缩，获得聚合度为4～15DP的β-1,3葡聚寡糖，其结构式如下式所示：β-1,3葡聚寡糖的结构式，n=2～13；制备步骤为：（1）先酸解再酶解，或先酶解再酸解，得到寡糖溶液；所述的先酸解再酶解方法，其反应体系是：热凝胶溶解于0.1M 三氟乙酸溶液中，1～2公斤的热凝胶溶解于8L该三氟乙酸溶液，60℃下水解处理8-24小时，再用氨水调整pH 6.0；然后按照热凝胶︰酶=（10～20）︰（1～2）的质量比例加入β-葡聚糖酶，37℃下水解5-24小时；所述的先酶解再酸解方法，其反应体系是：热凝胶溶于0.01M Ba(OH)₂溶液中，1~2公斤的热凝胶溶解于8L该Ba(OH)₂溶液，搅拌直至热凝胶完全溶解，用硫酸调整pH 7.0，按照热凝胶︰酶=（10～20）︰（1～2）的质量比例加入β-葡聚糖酶粉，混合均匀；溶液用无水乙酸调至pH 6.0，在37℃条件下水解2-24小时；然后再用0.1M三氟乙酸调整溶液 pH 2～5，60℃下水解1-16小时；（2）将所得寡糖溶液用超滤膜进行分离和浓缩：选用截留分子量为15000Da的中空卷式膜来进行分离，操作压为0.5MPa，按照1︰5的体积比来进行超滤，用pH 6.0、5倍于所得寡糖溶液体积的水溶液推动寡糖溶液过膜，超滤时间为25分钟；截留液继续用于酶解或酸解；对透过液的浓缩则采用截留分子量为1000Da的截留膜来进行，操作压为0.5MPa，超滤时间为25分钟；截留的浓缩液经过干燥后即得聚合度为4-15的β-1,3葡聚寡糖产品。