[发明专利]一种生产重组粉尘螨变应原Der f1和Der f2融合蛋白的方法无效
| 申请号： | 201210139240.0 | 申请日： | 2012-05-08 |
| 公开（公告）号： | CN102676568A | 公开（公告）日： | 2012-09-19 |
| 发明（设计）人： | 崔玉宝;蔡红星;杨庆贵;王运刚 | 申请（专利权）人： | 崔玉宝;蔡红星;杨庆贵;王运刚 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12R1/19 |
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| 地址： | 224056 江苏省盐*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 一种生产重组粉尘螨变应原Der f1和Der f2融合蛋白的方法，它涉及生物学技术构建粉尘螨变应基因技术领域。它通过提取粉尘螨总RNA，用PCR扩增获得其编码基因，切胶回收产物并命名为Der fm，克隆至pMD19-T载体、亚克隆至表达载体pET-28a(+)并转化至大肠杆菌并用IPTG诱导表达。它耗时短，过程简单，成本较低，可以彻底去除溶剂等成份，从根本上提高变应原的纯度，避免免疫治疗中副反应的发生，其纯度高，分类明确，可提高诊断的准确度，并有望为新型免疫治疗提供标准化制品。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 生产 重组 粉尘 螨变应原 der f1 f2 融合 蛋白 方法 | ||
【主权项】：
一种生产重组粉尘螨变应原Der f1和Der f2融合蛋白的方法，其特征在于它通过提取粉尘螨总RNA，根据GenBank公布的粉尘螨变应原第1组份(Der f1)和粉尘螨变应原第2组份(Der f2)核酸序列设计引物，用PCR扩增获得其编码基因，依次克隆至pMD19‑T载体、亚克隆至表达载体pET‑28a(+)并转化至大肠杆菌并用异丙基‑β‑D‑硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达，以PMD19‑T‑Der f1、PMD19‑T‑Der f2为模板，PCR扩增后切胶、回收产物Der f1和Der f2，PCR搭链构建嵌合基因片段，切胶回收产物并命名为Der fm，克隆至pMD19‑T载体、亚克隆至表达载体pET‑28a(+)并转化至大肠杆菌并用IPTG诱导表达。所有表达产物经琼脂糖凝胶FF亲和柱层析纯化后，用SDS‑PAGE和Western‑blotting验证产物。
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