[发明专利]一种提高苯系物细胞传感器检测效果的固定化方法

摘要

本发明涉及一种提高苯系物细胞传感器检测效果的固定化方法，属于微生物固定化和污染物检测技术领域。该方法以海藻酸钙为包埋介质，对苯系物细胞传感器Pseudomonas fluorescens A506(pTS)进行固定化处理，从而提高细胞传感器的检测效果。方法过程包括：(1)细胞传感器的生长至指数生长末期；(2)细胞传感器的离心并用磷酸缓冲液重悬；(3)用海藻酸钠溶液将细胞传感器混匀，并逐滴加入2％CaCl2溶液中低速搅拌，固化2h形成颗粒；(4)向含有苯系污染物样品中加入固定化颗粒，运行一定时间后对荧光信号进行检测。该方法得到的固定化细胞传感器，单位体积荧光信号相对与游离细胞提升至游离细胞的2.23倍，同时将细胞浓度控制在游离细胞的4.5％。通过极少的细胞得到了比游离细胞更高的单位体积荧光信号，更有利于细胞传感器对苯系物染污的检测。

主权项

一种利用海藻酸钙固定化处理提高苯系物细胞传感器荧光假单胞菌(pseudomonas fluorescens)A506(pTS)检测效果的方法，其特征在于，通过固定化处理，提高了细胞传感器单位体积荧光信号和单个细胞荧光信号强度；具体步骤如下：(1)细胞传感器准备：细胞传感器接种于已灭菌的LB培养基中，并在摇床中以30℃、200rpm的条件过夜生长，直到细胞进入指数生长末期(OD600＝2.400)；(2)细胞传感器洗涤：取生长好的菌液20mL在4℃下离心，转速4000r/min，离心10min。去掉上清液后用用灭菌的磷酸缓冲液((NH)2HPO43.0g/L，KH2PO41.2g/L，NaCl5.0g/L，MgSO4·7H2O0.2g/L)洗涤、重悬；重复重悬、离心2次后，菌体用5mL磷酸缓冲液重悬；(3)细胞传感器固定化：在5mL菌液中加入等体积已灭菌的海藻酸钠(4％)溶液；充分混合后，在距离CaCl2(2％)溶液液面10crm以上的位置，通过针头逐滴加入CaCl2溶液中并形成球状颗粒；使用磁力搅拌器对CaCl2溶液进行低速搅拌2h，之后含有细胞传感器的固定化颗粒用已灭菌的生理盐水洗涤，并保存于冰箱4℃中待用；(4)信号检测：将50个含有细胞传感器的固定化颗粒加入到50mL含有苯系物染污的培养基中，在以30℃、200rpm的条件下运行；之后取4个固定化颗粒置于96孔板中，通过全波长扫描式多功能酶标仪对荧光信号进行扫描，完成检测。