[发明专利]一种表达蛇毒激肽原酶的高效麦胚无细胞蛋白合成系统的建立及应用无效
| 申请号： | 201210153576.2 | 申请日： | 2012-05-16 |
| 公开（公告）号： | CN102732548A | 公开（公告）日： | 2012-10-17 |
| 发明（设计）人： | 罗云波;许文涛;黄昆仑;马骉;王云鹏;宋梦薇;张雅楠 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学;北京赛升药业股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/66;C12N9/64 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100093 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明建立了一个用来高效表达重组蛇毒激肽原酶的麦胚无细胞蛋白合成系统，其是通过反转录克隆了江浙蝮蛇中的蛇毒激肽原酶基因，构建麦胚无细胞表达质粒pCS2+/VK，制备麦胚抽提物，建立体外转录和翻译体系，对蛇毒激肽原酶进行表达并对系统进行了优化。该表达系统所表达的外源蛋白的N端具有His蛋白标签，通过Ni柱洗脱的方法进行纯化，极大地简化了重组蛋白的后续纯化工作，且纯化效率高、成本低。该外源蛋白还具有生物学活性为下一步临床研究奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 表达 蛇毒 激肽原 高效 麦胚无 细胞 蛋白 合成 系统 建立 应用 | ||
【主权项】：
一种表达蛇毒激肽原酶的高效麦胚无细胞蛋白合成系统的建立方法，其特征在于，其包括步骤：1）从江浙蝮蛇组织中提取总RNA，经RT‑PCR扩增得到蛇毒激肽原酶VK基因；2）以pCS2+作为表达载体，将VK基因插入到表达载体中并引入His标签得到麦胚无细胞表达载体质粒；3）将表达载体转入大肠杆菌，筛选阳性克隆，得到重组大肠杆菌工程菌，建立体外转录、翻译系统。
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