[发明专利]纤维素固定化顺式环氧琥珀酸水解酶及制备酒石酸的方法无效
| 申请号： | 201210156272.1 | 申请日： | 2012-05-21 |
| 公开（公告）号： | CN102703419A | 公开（公告）日： | 2012-10-03 |
| 发明（设计）人： | 崔球;王珊;崔古贞;冯银刚 | 申请（专利权）人： | 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 |
| 主分类号： | C12N11/12 | 分类号： | C12N11/12;C12P7/46 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 266101 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种纤维素固定化顺式环氧琥珀酸水解酶的方法，包括以下步骤：将编码顺式环氧琥珀酸水解酶基因与碳水化合物结合模块CBM30融合，融合基因在大肠杆菌中高效表达，然后采用纤维素对粗酶液中的融合酶进行纯化固定。本发明还提供了一种采用纤维素固定化顺式环氧琥珀酸水解酶作为生物催化剂，催化水解环氧琥珀酸转化为L型-酒石酸或D型)-酒石酸的方法。本发明的有益效果是，采用纤维素固定化顺式环氧琥珀酸水解酶，不但明显提高了酶的稳定性，而且作为纯化及固定基质的纤维素价廉易得，具备良好的经济前景。采用纤维素固定化顺式环氧琥珀酸水解酶制备酒石酸的方法具有反应具备特异性，产品纯度高，反应效率高等优点。 | ||
| 搜索关键词： | 纤维素 固定 顺式 琥珀酸 水解 制备 酒石酸 方法 | ||
【主权项】：
纤维素固定化顺式环氧琥珀酸水解酶的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)在编码顺式环氧琥珀酸水解酶基因的N端或C端融合碳水化合物结合模块CBM30，得到融合表达载体；(2)将融合表达载体转化到大肠杆菌中，高效可溶性表达融合蛋白，得到目标菌体；(3)采用pH为7.4的磷酸盐缓冲液洗涤目标菌体并重悬细胞，将重悬细胞进行破碎，离心得到粗酶液；(4)将粗酶液与纤维素混合，离心得到沉淀，采用pH为7.4的磷酸盐缓冲液淋洗沉淀并再次离心，所得沉淀即为目标产物固定化酶。
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