[发明专利]一种通过发根农杆菌介导提高枣树对枣疯病抗性的方法

摘要

一种通过发根农杆菌介导提高枣树对枣疯病抗性的方法，以感染枣疯病的枣树组培苗的茎段为材料，用发根农杆菌进行侵染，在再生出的组培苗中筛选转健组培苗，然后继续培养脱菌，对转健组培苗进行分子检测确定不携带枣疯病病原体的转化苗，利用微嫁接技术对转化苗的抗病性进行检测验证，最终得到对枣疯病抗病性显著提高的枣树抗性苗。该方法简单易行，可在几个月内就获得对枣疯病抗性显著提高的枣组培苗。

主权项

一种通过发根农杆菌介导提高枣树对枣疯病抗性的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）发根农杆菌侵染与转健苗的获得  将感染枣疯病的枣组培苗嫩茎剪成长约1cm的茎段，用OD600为0.6‑1.0的发根农杆菌侵染5‑15min，然后转入pH值5.8的共培养基MS+5.5g/L琼脂+30g/L蔗糖+200μΜ乙酰丁香酮中共培养3‑7d，再转入pH值5.8的筛选培养基MS+5.5g/L琼脂+30g/L蔗糖+100mg/L头孢曲松钠中，在25±2℃，光照/黑暗为14/10h的条件下培养60d，筛选出枣疯病症状消失的转健苗；（2）转健苗的脱菌继代  将转健苗转入添加头孢曲松钠50‑100mg/L、pH值5.8的MS+5.5g/L琼脂+30g/L蔗糖+0.2mg/L BA+0.1mg/L IBA培养基中继续培养，每20d换一次培养基，并逐渐降低头孢曲松钠的浓度，直到转健苗完全脱除发根农杆菌，获得脱菌转健苗；（3）脱菌转健苗的检测  提取脱菌转健苗的基因组DNA进行rolC、rolD、tms基因的PCR检测和枣疯病病原体的检测，筛选出携带发根农杆菌rolC、rolD、tms基因而不携带枣疯病病原体的转化苗；（4）转化苗对枣疯病抗性的鉴定  采用组培微嫁接方法，将待鉴定的转化苗嫁接到疯组培苗上，嫁接苗在pH值5.8的MS+30g/L蔗糖+8g/L琼脂培养基中进行培养，观察嫁接苗生长和发病情况，不发病的转化苗说明其抗性得到了提高，即为抗性苗。