[发明专利]一种葡萄籽原花青素的制备方法

摘要

本发明提供了一种葡萄籽原花青素的制备方法，首先制备康宁木霉和黑曲霉直投式发酵剂，然后将葡萄籽经加水磨浆、加葡萄糖配料、高温灭菌、接菌发酵、离心除渣、超滤提取、干燥等工艺制成葡萄籽原花青素。

主权项

一种葡萄籽原花青素的制备方法，其特征在于它是按以下步骤进行制备：1）发酵菌株的选择及培养基的制备发酵菌株采购于中国工业微生物菌种保藏管理中心，分别如下：A菌——康宁木霉，Trichoderma koningii编号为：CICC40505，培养基为：取去皮的马铃薯200克，切成小块，加水1000毫升煮沸30分钟，滤去马铃薯块，将滤液补足至1000毫升，加葡萄糖20克，溶化后分装，15磅灭菌30分钟。B菌——黑曲霉，Aspergillus niger，编号为：CICC41130，培养基为：蔗糖 30克, 硝酸钠2克,硫酸镁0.5克, 氯化钾 0.5克,硫酸亚铁0.01克, 磷酸氢二钾 1克, 蒸馏水 1000毫升，15磅灭菌30分钟。2）冻干菌粉末的活化分别量取0.9%的生理盐水10ml于2只试管内，经121℃灭菌20分钟冷却至30℃，将2株菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0.9%的生理盐水中，震荡使其溶解，在30℃恒温箱中静止活化30分钟，备用。3）母发酵剂的制备分别量取2株菌培养基各200ml于2只500ml三角瓶内，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，按培养基体积的10%接种2）步骤中已经活化的菌种，在30℃、150转/分钟，摇床培养24小时，作为母发酵剂。4）生产发酵剂的制备首先配置10%的脱脂奶乳浊液，向脱脂乳中加入5%的液态甘油、2%低聚木糖、2%蔗糖，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，分别按5%体积比例接种母发酵剂，在30℃、150转/分钟，摇床培养30—36小时，检测2株菌生产发酵剂活菌数，各生产发酵剂活菌数≥109个/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数＜109个/ml，继续培养，直至达到109个/ml。5）粉末冻干菌种的制备将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度0.8—1cm，加盖瓶塞后放入‑30℃冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘盛装，放入冻干机进行冷冻干燥。6）直投式发酵剂的复配按冻干菌粉末重量，取A菌粉末2‑4份，B菌粉末3‑5份，充分混匀后制成直投式发酵剂，用于发酵葡萄籽浆，直投式发酵剂的添加量为葡萄籽浆中固形物重量的0.125%。7）原料粉浆选择无虫害、无病害、未发热霉变、水分含量5%以下的葡萄籽，按葡萄籽重量的3倍添加去离子水，然后进入胶体磨，循环磨浆制成葡萄籽浆。8）配料按葡萄籽浆重量的1%添加葡萄糖粉，充分搅拌，溶解葡萄糖，制成加糖葡萄籽浆。9）高温灭菌将加糖葡萄籽浆加热至121℃灭菌20分钟，然后冷却至30℃。10）接菌发酵按加糖葡萄籽浆中固形物重量的0.125%接种6）步骤制备的直投式发酵剂，30℃、150转/分钟，摇床培养48小时。11）离心除渣用管式离心机15000转/分钟离心去除发酵葡萄籽浆中的不溶性物质。12）超滤提取用截留分子量为5000 Da 的超滤膜过滤，取滤过液，再用截留分子量为150 Da 的超滤膜过滤，弃滤过液，取150 Da超滤膜截留的液体。13）干燥将经过12）步骤处理后获得的150 Da超滤膜截留的液体进行喷雾干燥，获得葡萄籽原花青素，即为成品。