[发明专利]一种邻苯二甲酸二丁酯的微生物制备方法

摘要

本发明提供了一种邻苯二甲酸二丁酯的微生物制备方法，具体是利用真菌Verticillium lecani或Beauveria tenella通过菌株液体发酵，发酵液萃取，高速逆流色谱分离纯化得到邻苯二甲酸二丁酯。本发明通过微生物发酵的方法制备得到邻苯二甲酸二丁酯，与液—固色谱相比，简化了样品预期处理工作，不用固态支撑体，不存在样品组分的不可逆吸附、变性、失活、拖尾等现象，分离能力强，分离效率高，分离时间短。与化学合成的方法相比，方法简单，成本低，而且生产过程不产生污染。

主权项

一种邻苯二甲酸二丁酯的微生物制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)一级斜面菌种培养：将微生物菌种接入斜面培养基，在温度为20℃‑28℃，相对湿度为60%‑85%下培养，待菌丝长满斜面并产生孢子时备用；(2)二级菌种培养：在100‑200ml的三角瓶中加入30‑50%三角瓶体积的液体培养基，将斜面菌种在无菌条件下接入液体培养基中，在20℃‑28℃，150‑200r/min下培养7‑10天；(3)菌种发酵液培养：将二级菌种接入液体发酵罐中，发酵罐装液量为罐容积的65‑75%，接种量为装液量的5‑10%，通气量按体积比1:1，压力0.1MP，在20‑28℃培养10‑15天；(4)将培养好的菌种发酵液在4000‑5000r/min下离心10‑15min，除去菌丝体，将上清液在45‑60℃下减压浓缩至原体积的1/4‑1/5，室温下按体积比加入2‑4倍乙醇，静置24h‑36h，4000‑5000r/min下离心10‑15min，去除沉淀，再将上清在45‑60℃下减压浓缩至原体积的1/4‑1/5，得浓缩脱醇液；(5)将浓缩脱醇液加入等体积乙酸乙酯，超声萃取3‑5次，合并有机相并浓缩干燥，用少量的乙酸乙酯重新溶解，然后干燥得乙酸乙酯粗提物；(6)高速逆流色谱分离纯化：分离系统为正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水配制的两相溶剂，体积比：正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水=4∶5∶4∶5，在转速为820r/min，流动相流速为1ml/min的条件下进行分离，450min后停止分离，将螺旋柱中的固定相用氮气吹出并收集，将收集液减压浓缩至无色油状液体，即为邻苯二甲酸二丁酯。