[发明专利]一种琼脂扩散法检测鸭黄病毒抗体的方法

摘要

本发明提供了一种琼脂扩散法检测鸭黄病毒抗体的方法，属于兽医传染病学和免疫学领域。所检测的鸭黄病毒为安徽某鸭场分离株，将病料接种SPF鸡胚，传至5代，获得稳定毒株，命名为鸭黄病毒AH-F10株。尿囊液经甲醛灭活加入白油佐剂乳化，制备灭活疫苗，连续两次免疫产蛋鸭获取鸭黄病毒阳性血清。该阳性血清与经甲醛灭活的鸭黄病毒液进行琼扩反应，可呈现清晰的沉淀带。通过不同缓冲液及缓冲液不同浓度对阳性血清琼扩效价的影响，确定该琼扩反应最适的缓冲液及缓冲液浓度。该方法可较为简便的诊断目前我国流行的鸭黄病毒病，做为流行病学调查的操作简便，效果明显，成本低廉的检测方法。

主权项

一种琼脂扩散法检测鸭黄病毒抗体的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：（1）无菌采集感染鸭黄病毒的病鸭卵巢病变组织，将其研磨匀浆后反复冻融三次，12000r/min离心10min；无菌条件下取其上清液，将上清液经0.22um微孔滤膜过滤除菌后接种10日龄SPF（即无特定病原体）鸡胚，0.2mL/枚，于38℃孵化箱孵育，弃去24小时内接种死亡的鸡胚，收获48小时至120小时内死亡鸡胚尿囊液，连续传至5代，收获病毒尿囊液；将第5代黄病毒尿囊液经3‰甲醛混合摇匀，于37℃摇床内灭活36小时，得到鸭黄病毒琼扩抗原；（2）用pH值为7.2，浓度为1/15M的PBS缓冲液配制1%琼脂糖凝胶，制备琼扩平板，琼脂糖凝胶厚度在4.8mm～5.2mm之间，用七孔梅花打孔器打孔；将制备的琼扩抗原加入中间孔，其加入量为每孔25微升；将待检测的琼扩抗体按2倍稀释后的浓度依次加入周围六孔，即加入六孔的琼扩抗体的浓度分别是原琼扩抗体浓度的2‑1,2‑2,2‑3,2‑4,2‑5，2‑6；将琼扩平板于37℃湿盒中反应15小时后观察，读取琼扩效价。