[发明专利]一种利用生物相容的高分子修饰葡萄糖氧化酶表面以提高其寿命和稳定性的新方法

摘要

本发明提出了一种对葡萄糖氧化酶的表面进行改造的新方法，以期通过葡萄糖氧化酶表面的氨基基团对其进行改造，使其热稳定性和寿命得到提高。该方法用带有巯基噻唑啉末端基的RAFT试剂，通过RAFT(可逆加成断裂链转移)聚合法合成了α-(1-氧代-2-丙烯基)-ω-甲氧基聚(氧乙烯)(PEG-A)高分子聚合物。通过高分子链末端的巯基噻唑啉基团，与葡萄糖氧化酶表面的氨基进行酰胺化反应，从而连接在其表面。改造后的葡萄糖氧化酶，其表面的高分子链把酶的活性中心(FAD)等组分部分包围，对酶的结构起到了稳固和保护作用。因此，改造后的葡萄糖氧化酶具有优良的热稳定性和更长的使用寿命。

主权项

一种利用生物相容的高分子修饰葡萄糖氧化酶表面以提高其寿命和稳定性的新方法(1)带有巯基噻唑啉末端基的RAFT试剂的合成：取RAFT试剂0.527g，2‑巯基噻唑啉0.238g，溶于10ml二氯甲烷中，再加入二环己基碳二亚胺(DCC)0.497g，和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)24.5mg，在室温下搅拌7小时，反应结束后，抽滤除去固体颗粒，然后通过硅胶柱提纯产物。(2)PEG‑A聚合物的合成：将带有巯基噻唑啉末端基的RAFT试剂7.6mg，α‑(1‑氧代‑2‑丙烯基)‑ω‑甲氧基聚(氧乙烯)(PEG‑A)2g，偶氮二异丁氰(AIBN)1mg，溶解在4ml二氧六环中。其中，RAFT试剂与PEG‑A的摩尔比为1∶100。通氮气除氧40min，然后密封反应体系，在75℃的油浴中搅拌反应5小时，反应结束后，用乙醚沉淀提纯聚合物，得到预期的产物。(3)高分子聚合物链连接在葡萄糖氧化酶上：把5mg的葡萄糖氧化酶溶液在5ml磷酸盐缓冲液中(pH＝7)，按照摩尔比1∶30的比例加入合成的聚合物，室温下搅拌48小时，反应结束后，用截留分子量10万的透析袋进行透析提纯，提纯后冷冻干燥，得到产物，然后进行酶活性、热稳定性及储存性的测试。