[发明专利]无选择标记残留的乳酸菌基因组基因操作系统及其应用

摘要

本发明公开了一种无选择标记残留的乳酸菌基因组修饰操作系统及其应用，属于生物技术领域。具体地，本发明提供的载体系统包括：一个温度敏感型、大肠杆菌-革兰氏阳性细菌宽宿主范围穿梭型辅助质粒；一个用于构建温度敏感型、大肠杆菌-革兰氏阳性细菌宽宿主范围穿梭型基因打靶主质粒的中间质粒；一个经过以上二者所构建的用于任意位点基因修饰操作的基础乳酸菌菌株。本发明所提供的无选择标记残留的快速双质粒基因打靶载体系统可以获取任意位点基因缺失或插入的转基因重组乳酸菌，所产生的转基因乳酸菌或重组基因工程乳酸菌在益生菌开发和基因工程益生菌制剂的研究和应用中具有广泛的应用前景。

主权项

一种无选择标记残留的乳酸菌基因组修饰操作系统，其特征在于包括一个辅助质粒、一个用于构建基因打靶主质粒的中间质粒和一个作为基因操作基础的乳酸菌菌株，其中所述辅助质粒含有一个宽宿主范围穿梭型红霉素抗性基因和一个温度敏感型及宽宿主范围穿梭型完整的pWV01复制子；其中所述用于构建基因打靶主质粒的中间质粒含有一个宽宿主范围穿梭型氯霉素抗性基因、一个温度敏感型及宽宿主范围穿梭型完整的pWV01复制子和一个表达尿嘧啶磷酸核糖转移酶基因（upp）的宽宿主范围穿梭型表达盒；其中所述的乳酸菌菌株为缺失尿嘧啶磷酸核糖转移酶基因的任意乳酸菌菌株。