[发明专利]蚕豆蛋白水解物中的乳酸菌促生长肽的制备方法

摘要

本发明涉及一种蚕豆蛋白水解物中的促生长肽的制备方法，实施步骤如下：(1)利用蛋白酶对蚕豆蛋白进行酶解反应后将所得到的蚕豆蛋白水解物进行冷冻干燥；(2)干燥粉溶解在双蒸水中，制备成不同浓度的水溶液用于测定蚕豆蛋白水解物对保加利亚乳杆菌等乳酸菌的生长促进作用；(3)采用葡聚糖凝胶层析法进行分离纯化，得到促生长活性最高的组分；(4)再通过高效液相色谱法进行分离纯化，得到单一的促生长活性组分。利用基质辅助激光解吸飞行时间质谱MOLDI-TOF-MS进行分子量分析。本发明适合实验室分离纯化蚕豆多肽，可以分离出纯度较高的促生长肽。

主权项

一种蚕豆蛋白水解物中的促生长肽的分离纯化方法，其组成包括：(1)蚕豆分离蛋白的制备：料液比为1∶12，提取pH8.0，超声提取的功率660W，提取时间为20min，蚕豆分离蛋白中蛋白质含量为89.32％；(2)蚕豆蛋白水解物的制备：按底物浓度6％‑8％加入蒸馏水中混匀，70‑90℃下热处理蚕豆分离蛋白10‑15min，按照酶与底物比为84000‑96000U/g加入碱性蛋白酶，通过加入2M氢氧化钠来保持pH8.5不变，反应温度为50‑70℃，反应时间1h，水解度达到15‑18％；(3)水解后的蚕豆蛋白水解物进行冷冻干燥，将干燥粉溶解在双蒸水中，制备成不同浓度的水溶液用于测定蚕豆蛋白水解物对保加利亚乳杆菌等乳酸菌生长的促进作用；(4)蚕豆蛋白水解物采用葡聚糖凝胶Sephadex G‑25进行分离纯化，收集流出液并积累浓缩，得到促生长活性最高的组分；(5)再通过高效液相色谱法分离纯化，得到单一的促生长活性组分。利用基质辅助激光解吸飞行时间质谱MOLDI‑TOF‑MS进行分子量分析。