[发明专利]基于石墨烯/核酸染料平台检测miRNA的方法

摘要

本发明公开了一种基于氧化石墨烯/核酸染料检测平台和核酸恒温扩增技术检测miRNA的方法。首先根据靶miRNA的序列设计特异性的DNA发卡探针和扩增引物，将DNA发卡探针、引物、靶miRNA、DMSO、具有链置换扩增性质的酶及必须的反应物混合进行恒温扩增反应，再加入氧化石墨烯/核酸染料检测平台孵育，进行荧光检测。当靶miRNA存在时，检测体系有明显的荧光信号增强现象；没有靶miRNA的情况下，检测体系荧光信号很弱。本发明实现了使用非修饰的探针高灵敏，特异，简单快速的检测靶分子的目的，很适合在实际检测的应用中得到推广。

主权项

一种基于氧化石墨烯/核酸染料检测平台和核酸恒温扩增技术检测miRNA的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）设计DNA发卡探针：根据待检测的靶miRNA的序列进行设计DNA发卡探针，DNA发卡探针的5’端和/或3’端修饰有结合子；（2）设计用于链置换恒温扩增反应的引物：根据步骤（1）中设计的DNA发卡探针序列进行设计；（3）链置换恒温扩增反应：反应体系中包括待测的靶miRNA、步骤（1）和（2）设计制备的DNA发卡探针和引物、具有链置换性质的核酸扩增酶、4种脱氧核糖核苷酸以及其反应缓冲液，完成链置换恒温扩增反应；（4）加入氧化石墨烯/核酸染料检测平台：在步骤（3）所得的链置换恒温扩增产物中加入用检测缓冲液稀释的核酸染料和氧化石墨烯溶液进行孵育；（5）荧光检测：把步骤（4）得到的检测物放入荧光分析仪中测量荧光信号的强弱，根据测得的荧光信号值和标准曲线，即可定量检测出体系中靶miRNA的量。