[发明专利]一种II型胶原和硫酸软骨素的综合提取工艺

摘要

本发明公开了一种II型胶原和硫酸软骨素的综合提取工艺。本方法以新鲜牛关节软骨为原料，经脱脂、脱钙后，分散于乙酸溶液，经过酶解、离心，所得上清液再经过盐析、透析和冷冻干燥后得II型胶原。离心所得沉淀溶于NaOH溶液，加胰蛋白酶，40℃酶解后经脱色、乙醇沉淀、透析和冷冻干燥后得硫酸软骨素。II型胶原是软骨基质的主要有机成分，在组织工程、食品等领域有着广泛应用。硫酸软骨素普遍存在于人和动物的软骨组织中，具有降血脂、抗肿瘤等多种功能，具有广阔的应用前景。本发明实现了牛软骨II型胶原和硫酸软骨素的综合利用，为废弃物资源化利用提供了一条新的思路。

主权项

1.一种II型胶原和硫酸软骨素的综合提取工艺，其特征是提取步骤如下：1）原料预处理取新鲜牛关节软骨，切成小块，放入质量分数为5%～30%的NaCl溶液中，于20℃～25℃下搅拌24～48h，过滤，蒸馏水洗涤2～4次，然后放入0.5～1mol/L的乙酸溶液中，于20℃～25℃下搅拌24～48h，蒸馏水洗涤2～4次，粉碎；2）II型胶原的提取将上述粉碎物分散于0.5mol/L乙酸溶液中，加胃蛋白酶，其中胃蛋白酶与软骨的质量比按干重计为1：（5～100），震荡摇匀，室温下酶解72～100h，之后在室温下2000～4000r/min离心10min，得上清液A和沉淀B；取上清液A，加入NaCl溶液至NaCl的终浓度为0.7～2.0mol/L，静置过夜，离心后得白色絮状物；将上述白色絮状物装入透析袋，于蒸馏水中透析，每隔12小时换一次水，直至透析袋外蒸馏水的电导率不变为止，得II型胶原溶液，冷冻干燥后得II型胶原干品；3）硫酸软骨素的提取将沉淀B添加到5%～10%NaOH溶液中，40℃下搅拌1～2h，调pH值至7.0～9.5，之后按沉淀质量的1/(50～100)加入胰蛋白酶，40℃下搅拌酶解2～10h，得酶解液；向上述酶解液中加入活性炭脱色1～4h，过滤，离心，之后向离心所得上清液中加1～6倍体积的95%乙醇，静置沉淀6～12h，得沉淀物；将上述沉淀物装入透析袋内，于蒸馏水中透析，每隔12小时换一次水，直至透析袋外蒸馏水的电导率不变为止，得纯化后的硫酸软骨素溶液，冷冻干燥后得硫酸软骨素干品。