[发明专利]棘孢木霉几丁质酶基因及其表达棘孢木霉几丁质酶的方法无效

专利信息
申请号: 201210204728.7 申请日: 2012-06-19
公开(公告)号: CN103305539A 公开(公告)日: 2013-09-18
发明(设计)人: 咸洪泉;汤伟;李雅华;夏伟 申请(专利权)人: 青岛农业大学
主分类号: C12N15/56 分类号: C12N15/56;C12N9/42;C12N15/10;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/885;C12R1/84
代理公司: 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 代理人: 汤东凤
地址: 山东省青岛市城阳区青岛*** 国省代码: 山东;37
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摘要: 发明属于基因工程领域,具体地说是一种利用毕赤酵母工程菌株表达棘孢木霉几丁质酶的方法。发明以棘孢木霉(Trichoderma asperellum)为材料获得了1个几丁质酶基因,命名为tachi1,DNA序列为1679bp,含有3个内含子、1个1275bp的ORF,编码424个氨基酸。构建重组表达载体pPIC9K/tachi1,利用电击法转化Pichia pastoris GS115,工程菌株GS-tachi1-K接种于含BMMY培养基中,在28℃、200 rpm/min振荡培养7.5 d,几丁质酶活达到17.93 U/mL,蛋白表达量为6.19 g/L。SDS-PAGE检测该蛋白的分子量为44 kDa,酶反应最适的温度和pH分别为50 ℃和5.5,50 ℃以下保持较高的酶活力,在酸性条件下稳定。该酶活性高、稳定性好,有比较重要的经济价值和社会价值。
搜索关键词: 棘孢木霉 几丁质 基因 及其 表达 方法
【主权项】:
一种以棘孢木霉(Trichoderma asperellum)为材料获得的几丁质酶基因,命名为tachi1,其特征在于:该基因DNA为1679 bp,含有3个内含子和一个由1275个核苷酸构成的开放阅读框,编码424个氨基酸,其具体的核甘酸序列为SEQ.NO.1。
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