[发明专利]基于CHO细胞表达系统的重组人神经生长因子纯化方法

摘要

本发明涉及“基于CHO细胞表达系统的重组人神经生长因子纯化方法”，包括如下步骤：1）将上清先后离心去除活细胞、细胞碎片，过滤去除杂质和细菌；2）上清上样于EMD SO₃^-（M）层析柱，冲洗未结合蛋白以及杂质蛋白，洗脱，收集目的蛋白峰；用截留分子量为3K的超滤设备浓缩蛋白，4）上样于含Superdex 75层析柱，收集目的蛋白峰，即为重组人神经生长因子原液。本发明的表达系统和方法可以制备纯度大于98％，比活性高于5×10⁵AU/mg的重组人神经生长因子。本发明与其他方法相比减少了操作步骤，大大缩短了生产周期，提高了处理量和得率，适合规模化生产。

主权项

1.基于CHO细胞表达系统的重组人神经生长因子纯化方法，操作方法如下：1）将收获的高表达重组人神经生长因子的CHO细胞上清先后离心去除活细胞、细胞碎片，过滤去除杂质和细菌；2）将过膜后的细胞上清上样于pH6.0—8.0，20mmol/LPB缓冲液平衡好的EMDSO₃^-（M）层析柱，上样完毕后，用含0.2—0.5mmol/L NaCl，pH6.0—8.0的20mmol/L PB缓冲液冲洗未结合蛋白以及杂质蛋白，之后用含0.5—0.85mol/L NaCl，pH6.0—8.0的20mmol/LPB缓冲液洗脱，收集目的蛋白峰；3）将收集的目的蛋白峰，使用截留分子量为3K的超滤设备浓缩蛋白；4）浓缩后的蛋白上样于含0.15mol/L NaCl，pH7.0的20mmol/L PB缓冲液平衡好的Superdex 75层析柱，收集目的蛋白峰，即为重组人神经生长因子原液。