[发明专利]荒漠植物红砂RNA的提取方法

摘要

本发明涉及一种荒漠植物红砂RNA的提取方法，通过对红砂叶片撒PVPP研磨，将溶液离心，取上清液加等体积的氯仿和异戊醇，离心；再取上清液，加等体积的酚、氯仿和异戊醇，离心；取上清液再加等体积氯仿和异戊醇，再离心；取上清，向上清中加预冷的无水乙醇和LiCl，混匀，冰浴；再离心，倒掉上清液，加预冷的无水乙醇和醋酸钠，混匀后置于冰箱中，离心；弃上清，用75%乙醇漂洗二次，离心，收集沉淀，晾干，得纯净的RNA样品，溶于DEPC水中。本发明经过本发明对多酚、多糖、蛋白质及离子物质等次生代谢物的有效去除，获得纯净的RNA样品，并且产量高，耗时少，与现有方法相比，操作简单，RNA未受RNase（核糖核酸酶）的降解，完整性好。

主权项

一种荒漠植物红砂RNA的提取方法，其步骤是：① 取红砂叶片置于研钵中，在研钵里直接撒交联聚乙烯吡咯烷酮粉，研磨；② 将①研磨的粉末转移至离心管，加入65℃预热的十六烷基三甲基溴化铵提取缓冲液和β‑巯基乙醇；③ 将②中溶液涡旋2 min，65℃温浴8min，尔后，常温 12000 rpm离心15 min；④ 取③中上清液，加等体积的氯仿和异戊醇，氯仿︰异戊醇体积比为24︰1，混匀，18℃ 12 000 rpm 离心15 min；⑤ 取④中的上清液，加等体积的苯酚、氯仿和异戊醇，苯酚︰氯仿︰异戊醇体积比为25︰24︰1，抽提1次，18℃，12 000 r/min，离心15 min；⑥ 取⑤上清液，加等体积的氯仿和异戊醇，氯仿︰异戊醇体积比为24︰1，混匀，18℃ 12 000 rpm 离心15 min；⑦ 取⑥上清液，向上清中加1/2体积预冷的无水乙醇和1/2体积的8 mol/L LiCl，混匀，冰浴30 min；⑧ 将⑦冰浴的溶液，在4℃ 12000 rpm离心10 min，倒掉上清液，加2体积预冷的无水乙醇和1/10体积3 mol/L、pH为 5.2的醋酸钠，混匀后置于‑80℃冰箱中30 min后，4℃ 12 000 rpm离心15 min；⑨ 弃⑧中上清液，用体积浓度75%乙醇漂洗二次，4℃ 12 000 rpm离心15 min，收集沉淀，晾干，得纯净的核糖核酸样品，并溶于已高压灭菌处理的焦碳酸二乙酯水中。