[发明专利]利用高通量测序同时测定基因表达量和多聚腺苷酸加尾的方法有效
| 申请号： | 201210213994.6 | 申请日： | 2012-08-01 |
| 公开（公告）号： | CN102732629A | 公开（公告）日： | 2012-10-17 |
| 发明（设计）人： | 倪挺;魏刚 | 申请（专利权）人： | 复旦大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/10;C40B50/06 |
| 代理公司： | 上海正旦专利代理有限公司 31200 | 代理人： | 陆飞;盛志范 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属于基因组学技术领域，具体涉及一种利用高通量测序同时测定真核生物基因组中基因的表达量和多聚腺苷酸加尾的方法。本方法在逆转录时引入可被切除的特殊碱基，从而去除多余的腺苷酸，达到直接测定PolyA位点的目的。本方法无需信使RNA的纯化，直接进行逆转录，因此更简单；由于采用双端测序，因此更精确；本方法既能精确测定PolyA位点，又能可靠确定基因表达量，因此更省钱。该文库经高通量测序后获得基因表达及PolyA加尾的基础数据，再经过生物信息学分析获得基因的表达量和PolyA加尾的详细信息，为人类重要疾病的早期诊断和预后预测提供分析依据。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 通量 同时 测定 基因 表达 腺苷酸 方法 | ||
【主权项】：
一种利用高通量测序同时测定真核生物基因组中基因的表达量和多聚腺苷酸加尾的方法，其特征在于具体步骤为：直接片段化总RNA；在逆转录时引入可被切除的特殊碱基dUTP；用磁珠纯化双链DNA，用USER酶识别dUTP并释放磁珠上的双链DNA；该双链DNA经末端补平后加上一个3端腺苷酸突出；连接反应经纯化和片段大小选择后用相应的PCR引物扩增，获得可用于高通量测序的文库；构建的文库可以单端测序，也可以双端测序；该文库经高通量测序，获得基因表达及多聚腺苷酸加尾的基础数据，再经过生物信息学分析获得真核生物基因组中基因的表达量和多聚腺苷酸加尾的详细信息。
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