[发明专利]多肽内二硫键的定位方法

摘要

本发明涉及一种多肽结构的测定方法，尤其是一种定位多肽内二硫键连接结构的方法，包括以下步骤：1）将待测多肽与二硫苏糖醇在高温下孵育，加入TCEP反应，分离得到部分还原产物；2）将部分还原产物与碘乙酰胺在高温下反应，使二硫键断开部位的巯基烷基化；分离得到烷基化的部分还原产物；3）将烷基化的部分还原产物与二硫苏糖醇反应，使烷基化的部分还原产物中所有二硫键断开；4）用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱和电喷雾-四极杆-飞行时间质谱检测分析，定位二硫键连接结构；本发明的多肽内二硫键的定位方法，采用部分还原法联合MS/MS定位多肽内二硫键，操作简便，效率较高，结果准确。

主权项

一种多肽内二硫键的定位方法，包括以下步骤：1）制备部分还原产物：将待测多肽与二硫苏糖醇在高温下孵育10‑60min,加入TCEP反应5‑60min,分离得到部分还原产物； 2）制备烷基化的部分还原产物：将部分还原产物与碘乙酰胺在高温下反应5‑60min，使二硫键断开部位的巯基烷基化；分离得到烷基化的部分还原产物；3）断开所有二硫键：将烷基化的部分还原产物与二硫苏糖醇在高温下反应5‑60min，使烷基化的部分还原产物中所有二硫键断开；4）：用基质辅助激光解吸电离‑飞行时间质谱和电喷雾‑四极杆‑飞行时间质谱，采用纳喷技术结合碰撞诱导解离方法对断开所有二硫键的烷基化多肽进行检测分析，根据氨基酸被烷基化的情况以及多肽的以及一级结构定位二硫键连接结构；所述的高温指35‑75℃。