[发明专利]利用非暗培养叶片构建棉花BAC文库的方法有效
| 申请号： | 201210215857.6 | 申请日： | 2012-06-28 |
| 公开（公告）号： | CN102747427A | 公开（公告）日： | 2012-10-24 |
| 发明（设计）人： | 高海燕;王坤波;马峙英;刘方;王省芬;王春英;张香娣;王玉红;彭仁海 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院棉花研究所 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06;C12N15/10;C12N15/63 |
| 代理公司： | 北京法思腾知识产权代理有限公司 11318 | 代理人： | 高宇 |
| 地址： | 455000 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明涉及分子生物学领域，本发明具体涉及利用非暗培养叶片构建棉花BAC文库的方法。所述方法包括步骤：1）棉株叶片的选取；2）高分子量细胞核DNA的提取；3）高分子量DNA的部分消化及两次选择；4）大片段DNA的回收、连接及转化；5）插入片段的检测。该方法适用于构建所有棉花材料的BAC文库，包括种子量少或无种子但宿生保存的棉花材料。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 培养 叶片 构建 棉花 bac 文库 方法 | ||
【主权项】：
利用非暗培养叶片构建棉花BAC文库的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1）棉株叶片的收集：摘取田间或花盆正常生长、刚平展的幼嫩棉花叶片；2）提取高分子量细胞核DNA，将细胞核包埋在低熔点琼脂糖中，然后裂解释放核DNA；3）高分子量核DNA的酶切及两次选择，采用脉冲场凝胶电泳分离，对于第一次选择：脉冲的起始时间10s，选出120～300kb的DNA片段，分成120～200kb和200～300kb两个范围进行第二次选择，对于第二次选择：起始和终止时间分别为4s‑4s，电泳时间14h，选出120～200kb和200～300kb的DNA片段；4）分别对存在于胶块中的120～200kb，200～300kbDNA进行回收，与载体连接，然后转化感受态细胞；5）检测阳性克隆的插入片段是否满足实验需要。
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