[发明专利]一种抗动脉粥样硬化活性海带多糖的制备方法

摘要

本发明涉及一种抗动脉粥样硬化活性海带多糖的制备方法。具体的操作步骤如下：1.海带的洗涤，2.海带的水分脱除，3.海带粉的制备，4.多糖提取，5.褐藻酸盐的去除，6.蛋白的脱除，7.多糖的沉淀。本发明的提取溶剂是蒸馏水，改变了传统工艺中采用酸液或碱液进行提取，大大降低了生产过程中酸液或碱液对设备的腐蚀及对环境造成的污染；本发明方法制备的海带多糖组分A和多糖组分B具有很强的抗动脉粥样硬化活性，与模型组相比，多糖组分A和多糖组分B对低密度脂蛋白受体缺陷型小鼠动脉内膜脂质沉积的抑制率分别高达75％和87％，提示水溶性海带多糖是海带发挥抗动脉粥样硬化活性的物质基础。

主权项

一种抗动脉粥样硬化活性海带多糖的制备方法，其特征在于按下述步骤进行：（1）海带的洗涤：将鲜海带用自来水浸泡3天，每3小时换一次水并清洗；（2）海带的水分脱除：将上述洗干净的海带干燥处理，得干海带；（3）海带粉的制备：将干海带置于G－125型胶体磨中进行粉碎，过200目筛，得干燥的海带粉；（4）多糖提取：按重量体积比1:50向干燥的海带粉中加入蒸馏水，超声功率为600W条件下进行超声处理10 min，得海带粉和水的混合液A；再将混合液A置于磁力搅拌器上，转速2000 rpm、温度60 ℃条件下，搅拌提取3小时，得提取混合液B；将提取混合液B进行离心，收集上清液，得海带多糖提取液；（5）褐藻酸盐的去除：用浓度为1.5 M的盐酸溶液调节海带多糖提取液的pH值为1.2，得海带多糖提取液C，将海带多糖提取液C在转速12000 r/min下离心20 min，收集上清液D；离心所得沉淀为褐藻酸盐，弃去；（6）蛋白的脱除：先向上清液D中加入胰蛋白酶，得混合液E，混合液E中胰蛋白酶的终浓度为5 U/mL；将混合液E置于磁力搅拌器上，在转速1500 rpm、温度60 ℃条件下，反应3小时，得混合液F；按体积比1: 10将混合液F与化学脱蛋白试剂充分混合，得混合液G，将混合液G在转速12000 r/min下离心20 min，收集上清液H；所述化学脱蛋白试剂由氯仿和正丁醇按体积比1：4混合均匀；（7）多糖的沉淀：将上清液H进行减压浓缩，得浓缩液I；向浓缩液I中加入无水乙醇，按体积比使乙醇终浓度达到40％，静置12小时，离心，得沉淀①和上清液J；向上清液J中补加无水乙醇，按体积比使乙醇终浓度达到60％，静置12小时，离心，得沉淀②和上清液K；向上清液K中补加无水乙醇，按体积比使乙醇终浓度达到80％，静置12小时，离心，得沉淀③和上清液L；将沉淀①、沉淀②和沉淀③分别用30mL蒸馏水溶解，经冷冻浓缩干燥得多糖组分A、多糖组分B和多糖组分C；经活体动物实验分析，多糖组分A和多糖组分B能显著抑制低密度脂蛋白受体缺陷型小鼠动脉内膜脂质沉积，与模型组相比，其抑制率分别达到75％和87％，表明通过该种方法制备的海带多糖具有较强的抗动脉粥样硬化活性，多糖组分C未见明显的抗动脉粥样硬化活性。