[发明专利]非标记型均相比色检测铅离子的方法

摘要

一种非标记型均相比色检测铅离子的方法，由制备金纳米棒、配制核酸探针母液、测定金纳米棒-核酸探针溶液的紫外光谱、制作标准曲线、检测样品溶液中的铅离子步骤组成。本发明采用金纳米棒的等离子共振吸收光学性质和Pb2+能够诱导富G碱基DNA形成G-四链体结构，建立了一种快速简单比色检测Pb2+的方法。本发明经过检测灵敏度和选择性实验，结果表明，本发明检测铅离子的线性范围为5nM～1μM，检测限为3nM，具有方法简单、经济、选择性好、灵敏度高等优点，可用于样品中铅离子的检测。

主权项

一种非标记型均相比色检测铅离子的方法，由下述步骤组成：（1）制备金纳米棒①制备金种将7.5mL浓度为0.1mol/L的溴化十六烷基三甲铵加入含有98μL质量分数为1％的HAuCl4和152μL超纯水的烧瓶中，搅拌，加入600μL浓度为10mmol/L的NaBH4，搅拌2分钟，静置2小时，制备成金种；②制备金纳米棒溶液在47.6mL 0.1mol/L的溴化十六烷基三甲铵中加入788μL质量分数为1％的HAuCl4和1600μL H2O，再依次加入300μL 0.01M AgNO3和320μL 0.1mol/L抗坏血酸作为还原剂，搅拌2分钟，加入215μL金种，搅拌20秒，30℃静置24小时，制备成金纳米棒溶液装入棕色广口瓶，置于冰箱4℃保存备用；（2）配制核酸探针母液按常规方法将T30695核苷酸用10mmol/L pH为7.4的三羟甲基氨基甲烷‑醋酸缓冲溶液配制成物质的量浓度为100μmol/L的T30695核酸溶液，储存于‑20℃备用；T30695核苷酸DNA序列为5’‑GGGTGGGTGGGTGGGT‑3’；将T30695核酸溶液用10mmol/L pH为7.4的三羟甲基氨基甲烷‑醋酸缓冲溶液稀释成5μmol/L的核酸探针母液，置于冰箱4℃保存备用；（3）测定金纳米棒‑核酸探针溶液的紫外光谱将金纳米棒溶液与10mmol/L的三羟甲基氨基甲烷‑醋酸缓冲溶液混合，并加入5μmol/L的核酸探针母液混合均匀，5μmol/L的核酸探针母液与10mmol/L的三羟甲基氨基甲烷‑醋酸缓冲溶液、金纳米棒溶液的体积比为1：50～70：150～200，制备成金纳米棒‑核酸探针溶液，用紫外分光光度计测定紫外光谱；（4）制作标准曲线向金纳米棒‑核酸探针溶液中逐级加入铅离子标准溶液，依次配制成物质的量浓度为5nmol/L、10nmol/L、50nmol/L、100nmol/L、500nmol/L、1μmol/L、2μmol/L、3μmol/L的铅离子标准溶液，用紫外分光光度计测定上述不同浓度铅 离子标准溶液的紫外光谱，以lg浓度为5nmol/L‑1μmol/L铅离子溶液为横坐标X，吸光度的变化值ΔA为纵坐标Y，吸光度的变化值ΔA：ΔA=A0‑A式中A0为金纳米棒‑核酸探针溶液中金纳米棒的长轴吸光度，A为在金纳米棒‑核酸探针溶液中加入铅离子标准溶液后金纳米棒的长轴吸光度。由origin 8.0软件作图得标准曲线：Y=0.03245X+0.3030线性相关系数为0.9932；（5）检测样品溶液中的铅离子①水样的预处理：量取自来水100mL，煮沸5分钟去除氯，备用；②将金纳米棒‑核酸探针溶液与预处理的水样按体积比为3：1混合均匀，采用标准加入法进行铅离子的回收，按下式计算铅离子的回收率：R%=m测/m实式中m测是待测样品中铅的质量，m实是标准样品中铅的质量。