[发明专利]一种碱性木聚糖酶xynHBs核苷酸优化序列及其高效表达方法

摘要

本发明提出并公开了一种碱性木聚糖酶基因xynHBs核苷酸优化序列及其高效表达方法，它是将通过定点诱变的xynHB基因（Bacillussp.HBP8，GenBank登录号： AY954630），使用DNAworks软件，按照毕赤酵母的密码偏爱性将诱变过的xynHB基因序列进行优化而来。经PCR扩增，连接转化，测序验证，得到碱性木聚糖酶xynHBs的优化基因序列。用该序列构建重组质粒xynHBs-905A，并转入毕赤酵母GS115中，得阳性重组菌株GS115/xynHBs-905A。发酵培养阳性重组菌株，与含有未经序列优化基因的原始重组菌株相比，可制备得到比原始耐热碱性木聚糖酶蛋白质活性更高的木聚糖酶蛋白质。使用本发明碱性木聚糖酶xynHBs核苷酸优化序列利用毕赤酵母生产碱性木聚糖酶，目的蛋白表达量高，纯化过程简单，极大的降低了碱性木聚糖酶的生产成本，增加了企业对其的利用率。

主权项

一种碱性木聚糖酶xynHBs核苷酸优化序列，其特征在于优化后的xynHBs序列与原始序列xynHB相比，序列中139个碱基被优化且其中的毕赤酵母低频密码均被高频或次高频密码所替换，序列中除去了26个氨基酸的信号肽编码序列，经T4DNA聚合酶与dTTP处理后，序列的5'端形成了与Cpo I酶切位点相同的粘性末端、3'端形成了与Not I酶切位点相同的粘性末端。