[发明专利]甲型H1N1流感病毒(2009)实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种甲型H1N1流感病毒(2009)实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒。包括：捕获探针、H1N1(2009)检测引物T7引物和nT7引物、H1N1(2009)检测探针、M‑MLV反转录酶和T7 RNA聚合酶等试剂。本发明试剂盒能够检测拭子中的H1N1(2009)RNA，具有特异性高、灵敏度高(可达100copies/反应)、污染低(扩增产物RNA在自然环境下易于降解)及快速检测(常规50分钟完成检测)的特点，将在甲型H1N1流感早期感染的临床诊断中发挥重要作用。

主权项

1.一种甲型H1N1流感病毒(2009)实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒，其特征在于，包含有：一条序列表中序列1所示的甲型H1N1流感病毒(2009)的靶标核酸的捕获探针，所述靶标核酸为H1N1(2009) RNA，一对用于在M‑MLV反转录酶作用下产生H1N1(2009)靶标核酸的DNA拷贝的H1N1(2009)检测引物T7和nT7，一条用于与在T7 RNA聚合酶作用下根据所述H1N1(2009)靶标核酸的DNA拷贝产生的RNA拷贝特异结合的H1N1(2009)检测探针和一条H1N1(2009)核苷酸序列竞争性的内标和内标检测探针；其中，所述捕获探针的核苷酸序列如序列表中序列2所示：CCAUU GUCUG AACUA GAUGU UAAAA AAAAA AAAAA AAAAA AAAAA AAAAA AA；所述H1N1(2009)检测引物由T7引物和nT7引物组成，T7引物序列如序列表中序列3所示，nT7引物序列如序列表中序列4所示；所述H1N1(2009)检测探针的核苷酸序列如序列表中序列5所示：CACGG UACCG AGAUA UGCCC GUG，并且H1N1(2009)检测探针的5’端标记FAM荧光基团，3’端标记DABCYL淬灭基团；所述竞争性内标可与捕获探针特异性结合，并使用T7和nT7引物，所述竞争性内标是由序列表中序列7所示的H1N1(2009) IC RNA；所述内标检测探针的核苷酸序列如序列表中序列6所示，5’端标记HEX荧光基团，3’端标记DABCYL淬灭基团，所述内标检测探针存在于H1N1(2009)检测液中；并且，所述试剂盒含有由M‑MLV反转录酶和T7 RNA聚合酶构成的酶。