[发明专利]一种利用中国石蒜不带基盘鳞片组培快繁的方法

摘要

本发明涉及一种利用中国石蒜不带基盘鳞片组培快繁的方法，包括以下步骤：(1)以MS培养基为基础，添加6-BA、NAA、2，4-D等植物生长调节剂；(2)选取不带基盘的中国石蒜鳞茎或无菌培养的小鳞茎；(3)培养室温度控制在25±2℃，光照1000-1200lx；(4)诱导出愈伤组织及小鳞茎后，切割并转接于增殖培养基中继代；(5)壮苗培养；(6)生根培养；(7)幼苗消毒后移栽，保持湿润环境，待幼苗叶片伸展，即可进行正常管理。本发明利用中国石蒜不带基盘鳞片建立快繁体系，具有取材少、繁殖系数高等优点；得到的幼苗遗传基础一致、性状稳定、生长势整齐，在观赏和药用新品种栽培中具有显著的竞争优势。

主权项

一种利用中国石蒜不带基盘鳞片组培快繁的方法，其技术方案按如下步骤进行：(1)培养基的配方及配制诱导及扩繁培养基配方：MS+6‑BA 0.5mg/L+2，4‑D 1.0mg/L+蔗糖30g/L壮苗培养基配方：MS+6‑BA 1.0mg/L+2，4‑D 0.5mg/L+蔗糖30g/L生根培养培养基配方：1/2MS+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L具体的配制方法：A、按照MS培养基配方，分别配置10×大量元素、100×微量元素、100×铁盐及100×有机物的母液；B、加入一定量的母液，再加入相应的激素及蔗糖(30g)、琼脂(5.5g)，定容，调节pH值至5.9，微波炉加热，煮沸至溶液呈透明；C、将配制好的培养基分装在事先准备好的培养瓶中，1L一般分装20‑22瓶，然后盖上盖子并注明标签进行高压灭菌(121℃维持时间18‑25min)；D、灭菌过的培养基通常放在接种室或培养室中保存，放置24小时后使用，一般应在消毒后的两周内用完。(2)材料的选择及接种A：选取营养充足的中国石蒜鳞茎，去除表面杂物，用洗洁剂浸泡10min，再用流水冲洗2h。将鳞茎表面的水分吸干，选取上半部不带基盘的部分，进行灭菌，灭菌过程为：75％乙醇中消毒40s‑1min→无菌水清洗2次→0.1％HgCl2溶液中灭菌8‑12min(期间不断摇晃)→无菌水清洗5次。将灭好菌的材料用无菌滤纸吸干表面水分，用小剪刀将接触HgCl2的四周剪去0.5cm左右，再将其剪成长宽1cm左右的小片，即可接种到培养基中。B：选择无菌培养的小鳞茎转接，切除下半部基盘，去除上部叶片后，直接将其接种于培养基中，也可将其切成两半分别接种。(3)培养条件将接种好的材料放在培养架上，培养室温度控制在25±2℃，光照1000‑1200lx，16h/天。(4)诱导培养和增殖培养材料接种于诱导培养基上一个月后，即可诱导出的愈伤及小鳞茎，然后切割并转接于增殖培养基中，一般一次继代培养可扩繁4倍以上。继代培养可连续进行，继代周期一个月左右，达到预期扩繁数量为止。(5)壮苗培养将分化出的小鳞茎去除叶片，根系，直接接种于壮苗培养基中一个月，即可达到壮苗效果。(6)生根培养继代培养得到的小鳞茎直径达到0.5cm左右时，即可进行生根培养。将生长势健壮的中国石蒜小苗(适 当去除叶片减少营养消耗)转接于生根培养基上，一般半个月时间可长出一定量的健壮根系，待长出3条1cm以上的须根后，进行驯化移栽。(7)驯化移栽将幼苗根部附着的培养基用清水洗净，然后修剪去较长的根须，用稀释800‑1000倍的多菌灵浸泡10‑15min即可移栽于大棚苗床，保持空气湿度90％以上，并加盖遮阳网。半个月后，待幼苗叶片展开后，可除去遮阳网，进行正常栽培管理。