[发明专利]用低浓度的卡那霉素溶液浸种筛选和鉴定转基因棉花的方法有效
| 申请号： | 201210233348.6 | 申请日： | 2012-07-06 |
| 公开（公告）号： | CN102696477A | 公开（公告）日： | 2012-10-03 |
| 发明（设计）人： | 吕孟雨;王海波;董福双;徐显;赵和;柴建芳;孙果忠;石学萍;张欢欢;张俊敏;杨帆;刘永伟;朱金勇;韩秋芬 | 申请（专利权）人： | 河北省农林科学院遗传生理研究所 |
| 主分类号： | A01H1/04 | 分类号： | A01H1/04;A01C1/00;A01G31/00;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 石家庄新世纪专利商标事务所有限公司 13100 | 代理人： | 陈建民 |
| 地址： | 050051 河*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种用低浓度的卡那霉素溶液浸种筛选和鉴定转基因棉花的方法，技术要点如下：取转化含有nptⅡ标记基因的棉花种子，用浓度为1000-1500mg/l的卡那霉素溶液在24-26℃温度下浸种3d，所述卡那霉素溶液与转基因棉花种子的比例为：每50ml卡那霉素溶液浸8-12粒转基因棉花种子；将浸泡后的转基因棉花种子用自来水冲洗后播种到装有蛭石的纸桶中；当出苗3d后，根据棉花子叶上有无白化斑判断是否为转基因植株，将有白化斑的转基因棉花苗即阴性植株拔除，转基因棉花子叶上没有白化斑的绿苗即为阳性植株，然后进行分子鉴定和移栽。本发明的优点是成本较低、操作简单、准确可靠、容易掌握、出结果早。 | ||
| 搜索关键词： | 浓度 卡那霉素 溶液 浸种 筛选 鉴定 转基因 棉花 方法 | ||
【主权项】：
一种用低浓度的卡那霉素溶液浸种筛选和鉴定转基因棉花的方法，其特征在于步骤如下：（1）浸种处理：取转化含有npt‑Ⅱ标记基因的棉花种子，用浓度为1000‑1500 mg/l的卡那霉素溶液在24‑26℃温度下浸种3d，所述卡那霉素溶液与棉花种子的比例为：每50ml卡那霉素溶液浸10‑12粒棉花种子；（2）播种：将浸泡后的转基因棉花种子用自来水冲洗后播种到装有蛭石的纸桶中或直接播种到蛭石中；（3）筛选转基因植株：当出苗3‑5d后，根据棉花子叶上有无白化斑判断是否为转基因植株，将有白化斑的棉花苗即阴性植株拔除，棉花子叶上没有白化斑的绿苗即为阳性植株；（4）分子鉴定：对上述第（3）步中筛选的阳性植株再通过PCR检测进一步确认；（5）移栽：将进一步确认后的阳性植株炼苗后移栽到田间。
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