[发明专利]肉鹅屠体性状微卫星分子标记选择方法

摘要

本发明公开了肉鹅屠体性状微卫星分子标记选择方法，属于家禽选育技术领域。该方法包括：（1）设计鹅RY36位点的特异性引物：上游引物为5’-TCCCAGCTTCACTCCTTTTC-3’；下游引物为5’-GTGGTGTTCTTGCGGTGTAG-3’；（2)肉鹅屠体性状测定；（3）PCR扩增反应；（4）PCR扩增产物的多态性分析；（5）优胜肉鹅亲本个体的选择等步骤工艺。本发明是依据基因型进行肉鹅屠体性状选择，精确度高，操作简单；可以在肉鹅生命早期开始选择屠体性状，缩短世代间隔，加速肉鹅育种进程，每代可缩短选择时间3个月左右；该方法可在家禽育种领域中推广应用。

主权项

肉鹅屠体性状微卫星分子标记选择方法，其特征在于按以下步骤进行：（1）设计鹅RY36位点的特异性引物：根据鹅微卫星位点RY36两端的侧翼序列设计一对特异性引物，其上游引物序列为RYF: 5’‑TCCCAGCTTCACTCCTTTTC‑3’ ；其下游引物序列为RYR:5’‑ GTGGTGTTCTTGCGGTGTAG‑3’；（2) 肉鹅屠体性状测定：肉鹅屠体性状测定的指标有屠宰率、半净膛率、全净膛率、胸肌率和腿肌率，参照陈伟生，2006《畜禽遗传资源调查技术手册》操作；（3）PCR扩增反应：在每个肉鹅群体随机选择100‑200只肉鹅个体，翅静脉采集血液，按常规酚‑氯仿方法提取血液基因组DNA，并采用上述引物和基因组DNA模板进行PCR扩增反应，所采用的反应体系为10× Ex Taq Buffer (Mg2+ Plus) 2.5μL，2.5 mmol•L‑1 dNTPs 1.0‑3.0μL，5.0U•μL‑1Ex Taq 酶0.15‑0.35μL，10μmol/L上游引物0.4‑0.6μL，10μmol/L下游引物0.4‑0.6μL，50 ng•μL‑1模板DNA 0.5μL，ddH2O 17.45‑20.05μL；PCR扩增反应程序为 94℃预变性4min，按94℃ 40 S、50‑60℃30 S、72℃ 30S28‑35个循环,72℃延伸5min，4℃保存；（4）PCR扩增产物的多态性分析：先配制6%的变性聚丙烯酸胺凝胶用于PAGE电泳检测，其中聚丙烯9ml，尿素25.29g，5×TBE12 ml，10 % AP S600μl，TEMED 60μl并加水至60 ml后备用；取PCR产物5μl与等体积的6×loading buffer混合，加样到6%的变性聚丙烯酞胺凝胶上，并以100 bp ladder molecular size standard（Takara）为分子量标记，300 V电压电泳2.5 h；电泳结束后立即进行银染，首先用10 %冰醋酸固定加20 min，然后用去离子水清洗3次，每次2 min，再用已加入终浓度为 1.5 ml/L甲醛的0.1 %AgNO3染色30 min；去离子水快速冲洗10 s；再使用已加入终浓度为3 ml/L甲醛的3 %碳酸钠显影；最后再用10 %的冰醋酸固定5 min；以 gene mapper version 3.5软件分析微卫星位点RY36的基因型，筛选出AC、AD、BD、CC、CD、CG、DD、DE和EF 9种基因型肉鹅个体；（5）优胜肉鹅亲本个体的选择：选留AC基因型的个体作为肉鹅选择亲本，淘汰AD、BD、CC、CD、CG、DD、DE和EF基因型的个体。