[发明专利]利用原叶体增殖途径快速繁育鸟巢蕨种苗的方法

摘要

本发明属于农业生物技术领域，涉及一种利用原叶体增殖途径快速繁育鸟巢蕨种苗的方法，包括原叶体培养过程、增殖培养过程、孢子体诱导过程、生根诱导过程、移栽和管理过程。本发明工艺流程简单，以原叶体形式进行增殖，可获得大量的原叶体，通过增殖、孢子体诱导、孢子体生根、移栽等过程，获得大量可用于生产栽培的种苗，且获得的种苗生理年龄一致，生长整齐，适合工厂化育苗和规模化栽培。

主权项

一种利用原叶体增殖途径快速繁育鸟巢蕨种苗的方法，其特征在于，包括原叶体培养过程、增殖培养过程、孢子体诱导过程、生根诱导过程、移栽和管理过程，其步骤如下：1）、原叶体培养过程取带未散开孢子的鸟巢蕨叶片，清洗消毒后用无菌纸吸干水分，取出孢子接种到孢子萌发培养基培养40～60 d，待孢子萌发并长成绿色的原丝体；将孢子萌发后形成的原丝体接种于发育培养基上，25～30 d后原丝体发育成原叶体；所述孢子萌发培养基是以MS培养基为基本培养基，并添加BA 0.5 mg/L、蔗糖 30 g/L、卡拉胶 6.5 g/L，pH 5.8；所述发育培养基是以MS培养基为基本培养基，并添加6‑BA 1.0 mg/L、NAA 0.02 mg/L、蔗糖 30 g/L、卡拉胶 6.5 g/L，pH 5.8；2）、增殖培养过程将原叶体团切割成1 cm3的小块，接种到增殖培养基上进行继代增殖培养，每40d继代1次；所述增殖培养基是以MS培养基为基本培养基，并添加6‑BA 2.0 mg/L、NAA 0.01 mg/L、蔗糖30 g/L、卡拉胶6.5 g/L，pH 5.8；3）、孢子体诱导过程将经过继代增殖培养的原叶体切成0.5 cm3的小块，接种到孢子体诱导培养基上，20d后，原叶体精子器和颈卵器发育成熟，再培养，直至在原叶体团中分化出大量孢子体；所述孢子体诱导培养基是以MS培养基为基本培养基，并添加6‑BA 3.0 mg/L、NAA 0.01 mg/L、蔗糖30 g/L、卡拉胶6.5 g/L，pH 5.84）、生根诱导过程待孢子体的叶片伸长到2～3 cm时，将孢子体从原叶体团中单个分离出来，接种到生根培养基上，培养30 d后，在苗的基部形成棕色的根；所述生根培养基是以1/2MS培养基为基本培养基，并添加NAA 0.5 mg/L、IBA 0.3 mg/L、蔗糖30 g/L、卡拉胶6.5 g/L，pH 5.8；5）、移栽和管理过程A. 出瓶：将株高在4cm以上的生根苗连瓶放置在室外炼苗，一周后将苗移出培养瓶外，洗净小苗根部的培养基，进行移栽；B. 基质：分别取草炭土、椰糠和河沙，按重量比计：草炭土：椰糠：河沙=3:2:1的比例配成基质，提前浇透水，并覆盖薄膜保湿；C. 移栽：将已经湿透的基质进行浅翻，然后耙平，并用竹签打孔，孔深0.5 cm，将小苗轻轻放到孔中，并用周围的基质填充，稍压实，并用喷雾的方法淋水；D. 管理：移栽后7～10 d，覆盖薄膜保湿，基质湿度保持80%～90%左右，然后逐渐降低到70%；空气湿度90%以上，然后逐渐降低到60%～70%；遮阴60%～70%，然后逐渐减少到30%；E. 施肥：15～20 d后幼苗生新根，晴天上午采用0.2%～0.3%尿素溶液喷雾后，并用清水淋洗，每7 d施肥1次；F. 病虫害防治：利用500倍多菌灵、500倍百菌清、800倍甲霜灵复合防病，利用菊酯类杀虫剂除虫。