[发明专利]一种细胞外基质支架材料及其制备方法

摘要

本发明属于生物材料领域，公开了一种细胞外基质支架材料及其制备方法。本发明细胞外基质支架材料是通过体外单层高密度培养幼兔骨髓间充质干细胞，收集其分泌的细胞外基质,应用冻干技术及合适的交联剂将其制备成具有一定孔径和孔隙率的三维多孔状支架材料。该材料可以根据软骨缺损区或体外实验所需，任意修剪成合适的大小和形状，经环氧乙烷灭菌得到整体分装包。本发明细胞外基质支架材料以干细胞作为细胞外基质支架的材料来源，组织来源广、增殖能力强、自体即可获得充足的细胞量，避免了胚胎干细胞所牵涉的社会伦理学的问题。

主权项

一种基于骨髓间充质干细胞来源的细胞外基质支架材料，其特征在于该细胞外基质支架是通过如下方法获得的：（1）全骨髓培养法原代培养幼兔骨髓间充质干细胞:取2‑3周龄幼兔股骨和/或胫骨，消毒后置装有无菌生理盐水的培养皿中，在无菌条件下开放股骨和/或胫骨两端骨髓腔，用生理盐水冲洗骨髓腔，收集骨髓冲洗液，800～1200转/分速度离心8～10分钟，弃上清液，骨髓间充质干细胞沉淀用DMEM基培混悬，并计数，以1×108细胞密度将骨髓间充质干细胞接种于直径为150mm培养皿，每皿加含10%胎牛血清的DMEM培养液20ml，置二氧化碳培养箱内进行单层高密度培养，6～8天后进行第一次换液，之后每3天换液一次，整个培养周期为30～40天；（2）收集细胞外基质，并冷冻干燥：弃步骤（1）培养皿中的培养液，将皿底膜状或胶冻状的细胞外基质收集至装有含10mM EDC和10mM NHS的交联液的棕色玻璃容器中，浸泡20~25小时后先用5mMNa2HPO4洗2~5遍，每次20~30分钟，再用双蒸水漂洗2~5次，每次20~30分钟，然后1200~1800转/分速度离心8～15分钟，收集沉淀物经冷冻干燥得到基于骨髓间充质干细胞来源的细胞外基质支架材料。