[发明专利]一种稳定高效的木薯种质资源离体保存方法

摘要

本发明公开一种稳定高效的木薯种质资源离体保存方法。该方法是将无菌试管苗继代培养在添加一定浓度的卡那霉素（kanamycin）生长抑制培养基中，其配方为：MS+0.2mg/L NAA +80mg/L Kana +30g/L蔗糖+9g/L琼脂，pH=5.8。在无污染情况下，试管苗能正常生长保存22～24个月以上，是对照不添加生长抑制物质的培养基保存时间的10～12倍，且在生长抑制培养基中生长的试管苗根系较发达、节间显著缩短、茎节数显著增加、茎杆明显增粗、叶色浓绿，特别是温室移栽成活率高达90%以上，是对照的5～8倍。

主权项

一种稳定高效的木薯种质资源离体保存方法，其特征在于，包括离体保存材料的外植体消毒处理、无菌试管苗获得和试管苗的继代培养，其具体步骤如下：1）、外植体消毒处理在大田或实验室盆栽苗中，切取木薯带芽嫩茎，除去叶片和部分叶柄后，用洗衣粉浸泡20min，接着用自来水冲洗20min，在超净工作台上先用浓度为75%酒精浸泡8s，再放入0.5%升汞溶液中浸泡10～15min，用无菌水冲洗4～5次；2）、无菌试管苗获得将消毒后的嫩茎放在超净工作台上，切成单芽茎段，保留完整芽眼，并切除叶柄和茎段上、下端多余的部分，接种于以MS培养基为基本培养基，并添加奈乙酸0.2mg/L、蔗糖30g/L、琼脂9g/L固体培养基上；培养基用1 mol/L的氢氧化钠，调整pH值至5.8，在121℃灭菌20分钟后即可；将消毒处理好的外植体接种于上述固体培养基上培养数周后，获得无菌试管苗；培养条件为25±2℃，3000xl光照强度，16h/8h光周期；3）、试管苗的继代培养将经初代培养方法获得的无菌试管小苗，在超净工作台上用解剖刀剔除叶片后，把茎杆切成单芽茎段长1.2～1.5cm，其中每个茎段含有一个健壮的节，节上部分长0.4～0.5 cm，节下部分长0.8～1 cm，并将茎段形态学下端插入固体继代培养基中；所述固体继代培养基是以MS培养基为基本培养基，并添加NAA 0.2mg/L 、Kana 80mg/L、蔗糖 30g/L、琼脂 9g/L，pH 5.8；培养条件为25±2℃，3000xl光照强度，16h/8h光周期。