[发明专利]利用聚丙烯酸芘甲酯-聚（甲基）丙烯酸二甲胺乙酯共聚物检测核酸序列的方法及产物

摘要

本发明涉及一种利用聚丙烯酸芘甲酯-聚（甲基）丙烯酸二甲胺乙酯共聚物检测核酸序列的方法，属于功能高分子领域。该方法的过程包括将聚丙烯酸芘甲酯-聚（甲基）丙烯酸二甲胺乙酯荧光共聚物经卤代烷质子化制成带有正电荷的聚电解质，并将这种聚电解质与直链或者发卡结构的DNA作用形成新型荧光探针来检测目标DNA的方法。该方法的优点在于：是一种制备简单、操作简易、行之有效的新型荧光探针，将为稳定、高效、特异性识别核酸分子开辟一种新途径并在揭示疾病与基因变异等方面具有重要的科学意义和应用价值。

主权项

一种利用聚丙烯酸芘甲酯‑聚（甲基）丙烯酸二甲胺乙酯共聚物检测核酸序列的方法，所述的方法步骤包括：（1）共聚物的质子化：将聚丙烯酸芘甲酯‑聚（甲基）丙烯酸二甲胺乙酯和碘甲烷溶于有机溶剂四氢呋喃中，在常温下反应24小时；反应结束后，将溶剂四氢呋喃过滤掉，然后再用索氏提取器提取产物，其中提取剂为四氢呋喃，提取时间为12小时，最后再将荧光聚电解质P(DMAEMA+‑co‑Py)在真空干燥箱中以70℃温度干燥12小时；（2）新型荧光分子探针的配制：用缓冲溶液PBS：10Mm，pH=7.4，将（1）中制得聚电解质稀释制成原溶液，同样，分别用缓冲溶液PBS：10Mm,pH=7.4，将直链结构的单链DNA1或者发卡结构的单链DNA2溶解，最后，再取适当的聚电解质溶液与DNA1或者DNA2溶液混合，通过静电作用行成新型的直链或者发卡结构的荧光分子探针；（3）DNA杂交样品的配制：用缓冲溶液PBS：10Mm,pH=7.4，稀释不同序列的DNA3，DNAa，DNAc，DNAt；其中DNA3与DNA1完全互补配对，与DNAa，DNAc，DNAt完全不互补；DNA1与DNA2部分互补配对，与DNAa，DNAc，DNAt完全不互补；分别取一定量溶解好的DNA3，DNAa，DNAc，DNAt加入（2）中配好的荧光探针样品溶液中，最后将配好的所有溶液经过5分钟的90℃的热处理，再在40℃下保温半小时。