[发明专利]一种产腈水合酶优良菌种的选育方法无效
| 申请号： | 201210251644.9 | 申请日： | 2012-07-20 |
| 公开（公告）号： | CN102776142A | 公开（公告）日： | 2012-11-14 |
| 发明（设计）人： | 熊光辉;沈瑞华;杨涛;顾稀平;曹艳;张小琴;水瑞芬 | 申请（专利权）人： | 江苏南天农科化工有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12R1/365 |
| 代理公司： | 北京一格知识产权代理事务所(普通合伙) 11316 | 代理人： | 滑春生 |
| 地址： | 226500 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种产腈水合酶优良菌种的选育方法，对诺卡氏菌进行丙烯酰胺耐受性培养得到单菌落，经过摇瓶发酵得到二次出发菌种，再通过低温驯化培养，优选性能优良的腈水合酶酶菌种，其酶活性高达1643万μ/mg，比原诺卡氏菌菌株的腈水合酶酶活性854万μ/mg提高了92%，同时该菌株对丙烯酰胺的耐受性也提高了20%。为后续的丙烯酰胺生产提供高效的催化剂。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 水合 优良 菌种 选育 方法 | ||
【主权项】：
一种产腈水合酶优良菌种的选育方法，其特征在于包括以下步骤：（1）接种发酵液的制备：在无菌室内，将诺卡氏菌斜面菌种接种于装有发酵培养基的锥形瓶内，将锥形瓶放入摇床进行发酵培养，摇床转速设定为150‑200r/min，温度为28±2℃，培养100h后得到具有腈水合酶活性的发酵液；（2）耐受性培养：按照步骤（1）制备菌体发酵液，当发酵培养100h时，每隔1‑2h向摇瓶发酵液中加入含量95‑99%的丙烯腈2ml继续摇瓶培养，同时，每隔1‑2h取样进行平板菌落计数和酶活测定，筛选出一株最耐丙烯酰胺的二次出发菌种；（3）低温驯化培养：步骤（2）中得到二次出发菌种，取其发酵液5ml稀释100倍后，平皿涂布，分别置于10‑20℃的培养箱里低温培养100h，观察菌体生长情况；（4）扩大培养：将长出少数菌落的菌种进行摇瓶发酵，摇床转速设定为150‑200r/min，温度为28±2℃，培养100h后分别检测不同低温处理的腈水合酶酶活，从而得到酶活性最高的菌株。
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